人白細胞介素-1（IL-1）酶聯免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書(shu)

本試劑盒僅(jin) 供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人白細胞介素-1（IL-1）酶聯免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用於(yu) 測定人血清，血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中白細胞介素-1（IL-1）含量。

實驗原理

本試劑盒應用間接法測定標本中人白細胞介素-1（IL-1）水平。用純化的人白細胞介素-1（IL-1）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被抗體(ti) 的微孔中依次加入已知濃度的白細胞介素-1（IL-1）標準品和未知濃度的白細胞介素-1（IL-1）待檢樣品，溫育後，加入生物素標記的抗IgG抗體(ti) ，再與(yu) 鏈黴親(qin) 和素-HRP結合，形成免疫複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-1（IL-1）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素-1（IL-1）濃度。

試劑盒組成

1	20倍濃縮洗滌液	50ml×1瓶	9	標準品S1（120 ng/L）	0.5ml×1瓶
2	鏈黴親(qin) 和素-HRP	6ml×1瓶		標準品S2（80 ng/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條		標準品S3（40 ng/L）	0.5ml×1瓶
4	生物素標記的抗-IgG抗體(ti)	6ml×1瓶		標準品S4（20 ng/L）	0.5ml×1瓶
5	顯色劑A液	6ml×1瓶		標準品S5（10 ng/L）	0.5ml×1瓶
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	10	密封袋	1個(ge)
7	終止液	6ml×1瓶	11	封板膜	3張
8	樣品稀釋液	6ml×1瓶	12	說明書(shu)	1份

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融

操作步驟

1.      根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。

2.      加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗-IgG抗體(ti) ，鏈黴親(qin) 和素-HRP，其餘(yu) 各步與(yu) 樣品操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然後在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鍾。

3.      配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用

4.      洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複4次，拍幹。

5.      加生物素標記的抗-IgG抗體(ti) ：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體(ti) 50μl。37℃溫育30分鍾

6.      洗滌：操作同4。

7.      加鏈黴親(qin) 和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親(qin) 和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鍾。

8.      洗滌：操作同4。

9.      顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.

10.   終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.   測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行。

計算

  以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在5分鍾內(nei) ，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於(yu) 標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以稀釋倍數（×5×n）。

5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。

9. 如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。

線形範圍：

4 ng/L -150 ng/L

規格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(ge) 月