人抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)ELISA試劑盒說明書(shu)

本試劑僅(jin) 供研究使用       目的：本試劑盒用於(yu) 測定人血清，血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)水平。

實驗原理：

   本試劑盒采用雙抗體(ti) 夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中人抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)。用純化的抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，可與(yu) 樣品中抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分後再與(yu) HRP標記的抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），與(yu) CUTOFF值相比較，從(cong) 而判定標本中人抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)的存在與(yu) 否。

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鍾，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yang) 上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wan) /ml左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。

6. 標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

• 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）
• 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl。加樣將樣品加於酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
• 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。   
• 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml後備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行。

結果判定：

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨(lin) 界值（CUT OFF）計算：臨(lin) 界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨(lin) 界值（CUT OFF）者為(wei) 抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)陰性

  陽性判定：樣品OD值≥ 臨(lin) 界值（CUT OFF）者為(wei) 抗單鏈DNA抗體(ti) (ssDNA)陽性

注意事項

1．操作嚴(yan) 格按照說明書(shu) 進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

• 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準，使用雙波長檢測時，參考波長為(wei) 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。終止液為(wei) 2M的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(ge) 月

FOR RESEARCH USE ONLY

Drug Names

Generic Name：Human ssDNA ELISA Kit.

Purpose

This kit allows for the determination of ssDNA in Human serum, and other biological fluids.

Principle of the assay

The kit assay Human ssDNA level in the sample，use Purified Human ssDNA antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add ssDNA to wells, Combined With ssDNA, after washing and removing non-combinative antigen and other components ,then Combined ssDNA which with HRP labeled become antibody - antigen - enzyme- antibody complex, after washing Compley, Add TMB substrate solution,, TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. Compared with the CUTOFF value, according to this to judge ssDNA exist in the sample or not.