細胞破碎的方式
細胞破碎技術是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁的樣品處理方式,使細胞內(nei) 容物包括目的產(chan) 物成分釋放出來的技術,是分離純化細胞內(nei) 合成的非分泌型生化物質(產(chan) 品)的基礎。 結合重組DNA技術和組織培養(yang) 技術上的重大進展,以前認為(wei) 很難獲得的蛋白質現在可以大規模生產(chan) 。
細胞破碎阻力
細菌
幾乎所有細菌的細胞壁都是由肽聚糖(peptidoglycan)組成,它是難溶性的聚糖鏈(glycan chain),藉助短肽交聯而成的網狀結構,包圍在細胞周圍,使細胞具有一定的形狀和強度。短肽一般由四或五個(ge) 胺基酸組成,如L-丙氨酰-D-穀氨酰-L-賴氨酰-D-丙氨酸。而且短肽中常有D-胺基酸與(yu) 二氨基庚二酸存在。破碎細菌的主要阻力是來自於(yu) 肽聚糖的網狀結構,其網結構的致密程度和強度取決(jue) 於(yu) 聚糖鏈上所存在的肽鍵的數量和其交聯的程度,如果交聯程度大,則網結構就致密。
酵母菌
酵母細胞壁的裏層是由葡聚糖的細纖維組成,它構成了細胞壁的剛性骨架,使細胞具有一定的形狀,覆蓋在細纖維上麵的是一層糖蛋白,外層是甘露聚糖,由1,6一磷酸二酯鍵共價(jia) 連接,形成網狀結構。在該層的內(nei) 部,有甘露聚糖-酶的複合物,它可以共價(jia) 連接到網狀結構上的方式,也可以不連接。同細菌細胞壁一樣,破碎酵母細胞壁的阻力主要決(jue) 定於(yu) 壁結構交聯的緊密程度和它的厚度。酵母種類繁多,有部分很難破碎,對於(yu) 超聲波破碎儀(yi) 有更高的要求。基本上推薦Branson超聲波破碎儀(yi) 中的大功率型號,或者引入Branson大功率發生器,根據要求專(zhuan) 門設計使用方案。這樣可以保證理想的使用效果。
真菌
黴菌的細胞壁主要存在三種聚合物,葡聚糖(主要以β-1,3糖苷鍵連接,某些以β-1,6糖苷鍵連接),幾丁質(以微纖維狀態存在)以及糖蛋白。外層是α-和β-葡聚糖的混合物,第2層是糖蛋白的網狀結構,葡聚糖與(yu) 糖蛋白結合起來,第3層主要是蛋白質,內(nei) 層主要是幾丁質,幾丁質的微纖維嵌入蛋白質結構中。與(yu) 酵母和細菌的細胞壁一樣,真菌細胞壁的強度和聚合物的網狀結構有關(guan) ,不僅(jin) 如此,它還含有幾丁質或纖維素的纖維狀結構,所以強度有所提高。
植物細胞
對於(yu) 已生長結束的植物細胞壁可分為(wei) 初生壁和次生壁兩(liang) 部分。 初生壁是細胞生長期形成的。 次生壁是細胞停止生長後,在初生壁內(nei) 部形成的結構。 目前,較流行的初生細胞壁結構是由Lampert等人提出的「經緯」模型,依據這一模型,纖維素的微纖絲(si) 以平行於(yu) 細胞壁平麵的方向一層一層敷著在上麵,同一層次上的微纖絲(si) 平行排列,而不同層次上則排列方向不同,互成一定角度,形成獨立的網絡,構成了細胞壁的「經」,模型中的「緯」是結構蛋白(富含羥脯氨酸的蛋白),它由細胞質分泌,垂直於(yu) 細胞壁平麵排列,並由異二酪氨酸交聯成結構蛋白網,徑向的微纖絲(si) 網和緯向的結構蛋白網之間又相互交聯,構成更複雜的網絡係統。半纖維素和果膠等膠體(ti) 則填充在網絡之中,從(cong) 而使整個(ge) 細胞壁既具有剛性又具有彈性。在次生壁中,纖維素和半纖維素含量比初生壁增加很多,纖維素的微纖絲(si) 排列得更緊密和有規則,而且存在木質素(酚類組分的聚合物)的沉積。因此次生壁的形成提高了細胞壁的堅硬性,使植物細胞具有很高的機械強度。由於(yu) 植物細胞的相對壁厚,超聲波破碎產(chan) 品的能量集中度會(hui) 對處理結果有很大的影響。超聲波破碎儀(yi) 一般來說會(hui) 取得更好的表現。