用超聲波破碎儀(yi) 破碎大腸杆菌注意事項

用大腸杆菌表達外源蛋白，在進行超聲波破碎之前，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮，效果較好，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對其他的一些細菌同樣起作用，比如鏈黴菌。 
細菌沉澱直接加樣品1 buffer，再加5μl的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐裏加熱1min(下次適當補點醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min 就可以。在表達重組蛋白後超聲波破碎細胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一會(hui) 就產(chan) 生大量泡沫，影響了破碎功率， pbs和tris緩衝(chong) 液都是這樣，後都是破碎不*，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細胞中。
1*會(hui) 產(chan) 生氣泡是因為(wei) 你的探頭位置沒放好。超聲波破碎儀(yi) 探頭一定要接近底部，約1cm（推薦是距底部0.5mm）。功率根據儀(yi) 器不同會(hui) 有所不同，但你可以觀察液麵，有波動但不要太劇烈就好。
2*破3s停10s，破碎20-30個(ge) 循環觀察效果。 
3*探頭位置擺放也要注意，聽聲音如果不對的話就要及時調整。另外可以從(cong) 菌濃度方麵考慮。 在超聲波破碎時試著加大體(ti) 積,振幅盡量不要超過60%. 
4*嚐試超8s停8s,對有些菌體(ti) 蛋白來說，通常方法很難散熱，導致蛋白變性產(chan) 生氣泡，停頓時間稍長一些，這種情況多見於(yu) 包涵體(ti) 形式的蛋白。如果換用Branson超聲波破碎儀(yi) 來進行工作，由於(yu) 熱耗較小，停頓周期可適當減小。