免疫組化試劑盒使用說明書(shu)

保存方法：2-8℃保存。     有效期：一年。     生產(chan) 日期：見封口。

工作原理：

辣根過氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會(hui) 遮蓋抗原的結合部位，具有較高活性及特異性，可溶性佳，生成的產(chan) 物不擴散，可作用於(yu) 多種底物，產(chan) 生不同顏色且HRP穿透力強，易進入細胞內(nei) 。DAB在 H2O2存在的情況下，可以作為(wei) HRP的電子供體(ti) ，產(chan) 生褐色的不溶顆粒，可作為(wei) 顯色的試劑。

試劑盒內(nei) 容：

自備試劑：無水乙醇、蘇木素。

操作步驟：

1. 60℃常規脫蠟至水後，將石蠟切片先後浸入二甲本苯Ⅰ，二甲本苯Ⅱ各10min。然後逐級降濃度酒精入水，每次3-5 min。

1. 熱修複抗原： 將切片置於0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩衝液，微波爐加熱至沸騰後斷電，間隔5-10 min後，反複1-2 次，置於室溫自然冷卻。0.01 mol/L  pH6.0的PBS洗滌3次，每次5 min
2. 消除內源性過氧化物酶：用3% H ₂ O ₂ 室溫孵育 5-10 min，以消除內源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5 min；

4.滴加一抗： 滴加適當稀釋的一抗到切片上，37℃孵育1小時左右或者4℃過夜， pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 min 。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與(yu) 染色強度、背景有直接關(guan) 係。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗濃度和延長孵育時間；背景過高時，可降低一抗濃度和縮短孵育時間。）

1. 加入廣譜二抗，37℃孵育1小時，取出後PBS洗滌3次，每次5 min。
2. DAB顯色： 取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到切片上，室溫顯色，鏡下控製反應時間。若無背景出現則可繼續顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應。
3. .觀察顯色後自來水衝，蘇木目精複染1-2min，，自來水衝10min，梯度酒精脫水，二甲本苯透明，中性樹膠封片，幹燥，分析拍照