樣品去鹽技術

在免疫酶技術中，抗原、抗體(ti) 、酶及酶標記抗體(ti) （或抗原）在分離與(yu) 純化過程中，常常會(hui) 碰到去鹽這一實驗環節。經過去鹽，蛋白質溶液中不必要的無機鹽分子得以去除，從(cong) 而使蛋白進一步純化與(yu) 穩定。常用的去鹽技術如下：

1．透析

適用於(yu) 體(ti) 積不太大的蛋白質溶液，簡單方便，效果理想但費時。

2.凝膠過濾

適用於(yu) 體(ti) 積中等的蛋白質溶液，簡便快速，效果理想，但去鹽後的蛋白質溶液體(ti) 積增大較多。

3.超濾

適用於(yu) 體(ti) 積較大的蛋白質溶液，去鹽速度快，同時具有濃縮作用，但由於(yu) 膜吸附作用，樣品丟(diu) 失較多。

4.透析

實驗室常用的去鹽方法是透析法。

在透析法中所使用的透析袋，是一種鬥透膜。半透膜具有使小分子或離子透過，而蛋白質分子不能通過的特性。將蛋白質溶液裝入透析袋內(nei) ，浸泡於(yu) 蒸餾水中，由於(yu) 膜內(nei) 外可擴散離子濃度的差別，使蛋白質溶液中的無機鹽分子向膜外蒸餾水中擴散。如果經常更換蒸餾水，則可將蛋白質溶液中的鹽類分子全部除去，這就是半透膜的去鹽透析原理。假若膜外不是蒸餾水而是緩衝(chong) 液，可以經過膜內(nei) 外離子的相互擴散，改變蛋白質溶液的無機鹽成分，這就是半透膜的平衡透析原理。在離子交換層析前經常進行平衡透析處理。

半透膜透析去鹽過程如下：

• 依據樣品量的多少，剪取一段半透膜，浸在蒸餾水中一段時間，然後再用蒸餾水衝洗。
• 使用時，將半透膜一端折疊，封閉使之成底端，並用滴管加入蒸餾水檢查是否漏水。
• 在1000－2000ml大燒杯中注滿水，燒杯口上擱置一玻棒。
• 倒盡膜內蒸餾水，然後加入蛋白質樣品液（不能裝得太滿，以免脹裂），用橡皮筋紮牢管的上端，懸掛在玻璃棒中央，放入蒸餾水燒杯中。
• 將蒸餾水燒杯置於4℃冰箱中透析2－3天，每天換水3次以上。如果置於磁力攪拌器上攪拌透析，則去鹽效果更好。要經常檢查透析袋的紮口是否緊密，以防漏液。
• 按不同樣品要求去除不同無機鹽離子，可用特定的指示劑測定後透析用過的蒸餾水中是否還含有這種離子。

5．討論

（1）蛋白質樣品的濃度應透析後測定，因為(wei) 經過半透膜透析，膜內(nei) 滲透壓高於(yu) 膜外，水分子會(hui) 進入膜內(nei) ，所以在去鹽以後，蛋白質溶液體(ti) 積會(hui) 相應增大。

（2）有時會(hui) 在透析袋內(nei) 發生沉澱，一般而言，通過離心去除並不影響蛋白質樣品的性質。

 （3）透析袋在生理鹽水中浸洗後，還可繼續使用。