自然界的許多物質都可以作為(wei) 抗原,但用作診斷試劑的抗原必須是單一特異性的,即純化的抗原,所以必須將所需的抗原從(cong) 複雜的組分中提取出來,下麵介紹一些主要的製備方法。
顆粒性抗原的製備
顆粒性抗原主要指細胞抗原或細菌抗原,zui常用的細胞抗原是製備溶血素用的綿羊紅細胞。它的製備方法比較簡單,采用新鮮綿羊紅細胞,以無菌鹽水洗滌3次,zui後配成106個(ge) /mL濃度的細胞懸液即可。細菌抗原多用液體(ti) 或固體(ti) 培養(yang) 物經過集菌後處理製得。有些蟲卵、細胞膜成分都可製成顆粒抗原。顆粒抗原呈乳濁液,多采用靜脈內(nei) 免疫法,較少采用佐劑作皮內(nei) 注射。
可溶性抗原主要包括蛋白質、、脂蛋白、細菌毒素、酶、補體(ti) 等。但是這些蛋白的成分比較複雜,免疫前需要純化,常用的純化過程按以下步驟進行。
(1)組織和細胞粗抗原的製備 將新鮮或超低溫保存的樣品組織清洗幹淨後,剪成小塊後進行粉碎,常用的粉碎方法有高速組織搗碎機法和研磨法,粉碎後的組織勻漿液離心後上清液中就含有可提取可溶性抗原的材料――粗抗原。
(2)組織細胞可溶性抗原的製備 可用於(yu) 製備抗原用的細胞包括正常細胞、病理細胞或傳(chuan) 代細胞。製備抗原時需將細胞破碎後釋放出抗原。製備方法有反複凍融法、冷熱交替法、超聲破碎法、自溶法、溶菌酶處理法等。
(3)超速離心和梯度密度離心法 超速離心是分離亞(ya) 細胞部分及蛋白質大分子是有效手段,它又分為(wei) 差速離心和梯度離心。離心純化抗原的方法是依據抗原的比重特點進行分離,目前僅(jin) 適用於(yu) 少部分大分子抗原,如IgM、C19、甲狀腺蛋白等;對於(yu) 大量的中、小分子量蛋白質,多不適合用離心的方法進行分離純化。
(4)選擇性沉澱法 選擇性沉澱是采用各種沉澱劑或改變某些條件促使抗原成分沉澱,從(cong) 而達到純化的目的,主要包括鹽析沉澱法、有機溶劑沉澱法、水溶性非離子型聚合物沉澱法等。
(5)親(qin) 和色譜、凝膠過濾和離子交換色譜 采用各種色譜手段,可將某種蛋白質從(cong) 複雜組分中純化出來。
(6)純化抗原的鑒定 常用的方法有聚丙烯胺凝膠電泳法、結晶法、免疫電泳法、免疫雙擴散法等。一般常把幾種方法聯合使用才能判斷出可靠的結果。
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