ELISA方法的基本原理是：①使抗原或抗體結合到某種固相載體表麵，並保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表麵的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其他物質分開，zui後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物後，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由於酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。因此，ELISA檢測是一項定位、定性和定量(敏感度可達每毫升ng~pg水平)的綜合技術。常用的酶是辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AKP)

　　elisa試劑盒樣本準備及要求：

　　1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鍾，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。

　　2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。

　　3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

　　4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

　　5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘冷凍備用。

　　6. 標本采集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反複凍融.

　　7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

　　elisa試劑盒試驗操作注意事項：

　　1、試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟棄，不可保存。

　　2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

　　3、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

　　4、使用一次性的吸頭以免交叉汙染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

　　5、使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。

　　6、底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露於光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。

　　7、加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

　　8、按照試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。