DH5α Competent Cell

DH5α感受態細胞

目錄號：YJ0808

保存條件：-80℃保存。

組分說明

Cat. No.                                          YJ0808B

Size                                                10×100 μl         

DH5α Competent Cell                       10×100 μl           

Control DNA pUC19，0.1 ng/μl           10 μl        

產(chan) 品簡介

本產(chan) 品是采用大腸杆菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用於(yu) DNA 的熱擊轉化。DH5α是一種常用於(yu) 質粒克隆的菌株，其 φ80lacZΔM15基因產(chan) 物可與(yu) 載體(ti) 編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現 α互補，可用於(yu) 藍白斑篩選。 recA1和endA1的突變有利於(yu) 克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，適用於(yu) 的質粒DNA克隆並能保證高拷貝質粒的穩定複製。

注意事項

1. 感受態細胞一定要用幹冰運輸。感受態細胞應在 -80℃下保存，不可反複凍融和放置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。

2. 轉化所有步驟均在無菌條件下操作。

3. 包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

操作步驟

1．取感受態細胞置於(yu) 冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為(wei) 50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。

以 下 實 驗 以 50                                           μl 感 受 態 細 胞 為(wei) 例 。2．待感受態細胞融化後，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量

的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕

輕吹打混勻，冰浴30分鍾。

3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鍾。

4. 每個(ge) 離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yang) 基（不含抗生素），混勻後置於(yu) 37℃ 搖床，150 rpm振蕩培養(yang) 45分鍾使菌體(ti) 複蘇。

• 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的 SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的塗布棒將細胞均勻塗開，將平板置於37℃直至液體被吸收， 倒置培養，37℃培養12-16小時。

注意：1）塗布用量可根據具體(ti) 實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產(chan) 物塗布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產(chan) 物塗布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心（4,000 rpm，2分鍾）後吸除部分培養(yang) 液，懸浮菌體(ti) 後將其塗布於(yu) 平板中。

2） 新製備的固體(ti) 培養(yang) 基不易塗幹，可將平板正置於(yu) 37℃直至液體(ti) 被吸收後再倒置培養(yang) 。

3） 塗布剩餘(yu) 的菌液可置於(yu) 4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再塗布新培養(yang)   基進行培養(yang) 。