bEnd.3 小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 吸走多餘培養基，加入3-5mL PBS後輕輕晃動培養瓶潤洗細胞；
• 吸幹淨PBS後加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰酶浸沒細胞表麵，培養瓶放37度培養箱消化；
  （細胞對於消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代後不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞*漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
• 加入6-8ml*培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
• 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養；

傳(chuan) 代比例: 不同細胞生長速度不一，具體(ti) 傳(chuan) 代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳(chuan) 代，生長較慢的細胞可以1:2傳(chuan) 代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yang) 基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜後液氮保存。

Tips：

• 細胞經過運輸後，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰撞的死亡破碎形成碎片，是正常現象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
• 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散後加入新的培養基重新接種或傳代。
• 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養（不超過20%），也可以根據細胞生長狀態，選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。
• 不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細胞消化到相互分離但未脫落，並可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞*漂浮。客戶消化過度導致細胞死亡、漂浮、生長緩慢，不提供免費售後服務。
• 幹冰發貨均為兩支，客戶先複蘇一支，若複蘇失敗及時聯係我方並在我方指導下複蘇第二支。若客戶同時複蘇兩支均狀態不佳，我方不提供免費售後服務。
• 細胞狀態正常時，應盡快凍存細胞保種，凍存後應隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍存細胞導致死亡負責，客戶凍存細胞死亡不提供免費售後服務。

Notice：

      客戶收到細胞有任何疑問請及時致電我們(men) ，細胞收到後1周內(nei) 沒有任何電話，或其他形式回訪，默認為(wei) 細胞質量沒問題，之後出了任何問題不給予免費售後。細胞免費售後隻提供一次，若重發後再次培養(yang) 死亡不再免費補發，細胞收貨時已經死亡或密度不足的除外。