阿維菌素（IVM）ELISA檢測試劑盒
使用說明書(shu)
一、檢測原理
本試劑盒利用阿維菌素抗體(ti) 與(yu) 阿維菌素可產(chan) 生特異性結合的性質，先在酶標板上預包被抗原，再加入標準品（樣本）和阿維菌素抗體(ti) ，樣本或標準品中的阿維菌素藥物與(yu) 固定在酶標板上的抗原競爭(zheng) 阿維菌素抗體(ti) ，後加入底物催化顯色。此時顯色深度與(yu) 標準品（樣本）中阿維菌素藥物的含量成反比。
二、檢測範圍
本試劑盒是應用ELISA技術研發的藥物殘留檢測產(chan) 品，與(yu) 儀(yi) 器分析技術比較，能經濟、快速地檢測組織以及液態奶樣本中的阿維菌素。
三、交叉反應率
阿維菌素類……………………………………………100%
伊維菌素………………………………………………25%
埃普菌素………………………………………………10%
多拉菌素………………………………………………6%
四、試劑盒組成
酶標板1塊，96孔/板
標準液6瓶（1 mL/瓶）：
0ppb,0.5ppb,1.5 ppb，4.5ppb,13.5ppb,40.5ppb
酶標記物稀釋液 ………………………………………7mL
11×酶標記物濃縮液………………………………0.7mL
底物液A ………………………………………………7mL
底物液B………………………………………………7mL
終止液…………………………………………………7mL
20×濃縮洗滌液……………………………………30mL
複溶工作液………………………………50mL
組織樣本處理液……………………………10mL
說明書(shu) ……………………………………1份
五、使用單位需自備的設備及試劑
（1）儀(yi) 器
微孔板酶標儀(yi) (450 nm/630 nm)
振蕩器
離心機
渦旋儀(yi)
粉碎機
電子天平（感量0.01 g）
（2）器材
單道微量移液器：20 μL～200 μL，100 μL~1000 μL
多道微量移液器：30 μL～300 μL
（3）試劑
甲醇、去離子水
六、溶液的配製
樣本前處理需配製：
配液1：洗滌工作液
用去離子水將濃縮洗滌液（20×）按1 : 19體(ti) 積比進行稀釋，即1份濃縮洗滌液加19份去離子水。
七、樣本前處理方法
樣本處理前須知：
處理任何樣本時，都須注意：
（1）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（2）實驗之前須檢查各種實驗器具是否幹淨，必須使用潔淨實驗器具，以避免汙染幹擾實驗結果。
樣本前處理步驟：
組織：
1、 準確稱取2±0.05g均質後的組織樣品於(yu) 10 mL離心管中；
2、 依次加入2mL甲醇，100μL組織樣本處理液，充分渦動5 min使樣本分散；
3、 室溫下（25±2℃），4000 g離心10 min；
4、 取200μL上清液加入400μL複溶工作液中，渦動10s混勻；
5、 取50 μL用於(yu) 分析。
原奶：
1、 取1mL液態奶於(yu) 10 mL離心管中；
2、 加入3mL甲醇，充分渦動1 min；
3、 室溫下（25±2℃），4000 g離心10 min；
4、 取200μL上清液加入400μL複溶工作液中，渦動10s混勻；
5、 取50 μL用於(yu) 分析。
八、酶聯免疫檢測步驟
測定前須知：
1、使用之前將所有試劑和需用微孔板回升至室溫。
2、使用之後立即將所有試劑放回2~8 ℃。
3、在使用中不要讓微孔幹燥。
4、在ELISA分析中的重複性，很大程度上取決(jue) 於(yu) 洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
5、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
測定步驟：
1、將所需試劑和微孔板從(cong) 冷藏環境中取出，在室溫下平衡30 min，每種液體(ti) 使用前均須搖勻。注意標準液均需做2個(ge) 平行試驗。
2、酶標記物工作液：取1份11×酶標記物濃縮液加10份酶標記物稀釋液按照1:10的比例稀釋即得。
3、加標準品：加標準品/樣本50 mL/孔到對應的微孔中，加入酶標記物50 mL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光反應30 min。
4、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nei) 液體(ti) 甩幹，加洗滌液 300μL/孔，每次浸泡15~30 s，充分洗滌4~5次，用吸水紙拍幹。
5、顯色：加入底物液A液50 mL/孔，再加底物液B液50 mL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應15 min。
6、測定：每孔各加50 μL終止液，設定酶標儀(yi) 在450 nm處，測定OD值（建議用450/630 nm雙波長檢測，在5 min內(nei) 讀完數據）。
九、結果分析
所測得的標準液或樣品吸光度的平均值（B）除以DI一個(ge) 標準液（0標準液）的吸光度（B0）值再乘以100%，得到百分吸光度值。
百分吸光度值（%）＝
以標準品濃度的10為(wei) 底的對數為(wei) X軸， 百分吸光值為(wei) Y軸，繪製標準曲線。將樣本的百分吸光值代入標準曲線，從(cong) 標準曲線上讀出樣本所對應的值，作為(wei) 10的冪，乘以稀釋倍數，即為(wei) 樣品中所含阿維菌素的量。
利用試劑盒專(zhuan) 業(ye) 分析軟件進行計算，更便於(yu) 大量樣品的準確、快速分析。
九、樣本稀釋倍數
組織： 6倍
液態奶： 10倍
十、試劑盒靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.5ppb
樣本低檢測限：
組織……………………………………4 ppb
液體(ti) 奶…………………………………5 ppb
回收率：90%±30%
精密度：試劑盒的變異係數均小於(yu) 10%
十一、注意事項
1、室溫低於(yu) 20 ℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20~25 ℃）會(hui) 導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況，則會(hui) 出現標準曲線不成線性，重複性不好的現象，所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。
3、反應終止液為(wei) 2M硫酸，避免接觸皮膚；若不慎滴漏到皮膚上，請盡快用水衝(chong) 洗。
4、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會(hui) 引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
5、保存試劑盒於(yu) 2~8 ℃，不要冷凍，將不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
6、顯色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之；0標準的吸光度（450 nm）值小於(yu) 0.5（A450nm< 0.5）時，表示試劑可能變質。
7、在加入底物液後，一般顯色15 min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20 min（或更長），但不得超過30 min；反之，則減短反應時間。
8、該試劑盒zui佳反應溫度為(wei) 25 ℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
十二、貯藏條件及保存期
貯藏條件：在2~8 ℃保存試劑盒。
保存期：本試劑盒有效期為(wei) 12個(ge) 月。
