脲酶（UE）活性檢測試劑盒說明書(shu)

注意：正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。

 規格：100T/48S 產(chan) 品內(nei) 容：

提取液：液體(ti) 60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存，臨(lin) 用前加3mL蒸餾水充分溶解； 試劑二：液體(ti) 10mL×1瓶，4℃避光保存；

試劑三 A 液：液體(ti) 0.4mL×1 支，4℃保存；

試劑三 B 液：液體(ti) 1.6mL×1 瓶，4℃保存；臨(lin) 用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用； 試劑四：液體(ti) 2mL×1 瓶，4℃保存；

標準品：液體(ti) 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 氮標準液。

產品說明：

微量法

脲酶（UE）廣泛分布於(yu) 植物的種子中，也存在於(yu) 動物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲酶。UE能夠水解尿素產(chan) 生氨和碳酸，對尿素轉化起關(guan) 鍵作用。利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產(chan) 生的NH3-N來反應UE活性。

自備實驗用品及儀器：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

操作步驟： 一、樣品處理

1. 組織：按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5-10  的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液），冰上勻漿後於(yu) 4℃，12000g 離心15min，取上清待測。

• 細胞/細菌：按照細胞/細菌數量（104個）：提取液體積（mL）為500-1000：1 的比例（建議500 萬個細胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率300w，超聲3 s，間隔7 s，總時間3min）； 然後4℃，12000g 離心15min，取上清置於冰上待測。

3. 血清（漿）或其它液體(ti) ：直接檢測。二、測定操作：

1、可見分光光度計/酶標儀(yi) 預熱 30min，波長調至 630nm，可見分光光度計蒸餾水調零。

2、將 1mg/mL 氮標準液用蒸餾水稀釋至 2µg/mL 備用。

3、加樣表：

第 1頁，共 2 頁

三、計算公式：

1、液體(ti) 中UE活力的計算：

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）每分鍾產(chan) 生1µg NH₃-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE（U/mL）=∆A測定÷∆A標準×C標準品×V酶促÷V樣÷T

=0.233×∆A測定÷∆A標準。

2、組織、細菌或細胞中UE活力的計算：

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾產(chan) 生1µg NH₃-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（U/mg prot）=∆A測定÷∆A標準×C標準品×V酶促÷(V樣×Cpr)÷T

=0.233×∆A測定÷∆A標準÷Cpr。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾產(chan) 生1µg NH₃-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（U/g鮮重）=∆A測定÷∆A標準×C標準品×V酶促÷(W× V樣÷V提取)÷T

=0.233×∆A測定÷∆A標準÷W。

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1百萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾產(chan) 生1µg NH₃-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（U /106 cell）=∆A測定÷∆A標準×C標準品×V酶促÷(細胞數量×V樣÷V提取) ÷T

=0.233×∆A測定÷∆A標準÷細胞數量。

C標準液：標準液濃度，2µg/mL；T：反應時間，60min；V酶促：酶促反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.14mL；

V樣：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.02mL；V提取：提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；

W：樣本質量，g；細胞數量：以百萬(wan) 計。注意事項：

1. ∆A測定大於(yu) 0.6時，建議將反應混合液用蒸餾水稀釋或者樣品用蒸餾水稀釋後在進行測定。

小鼠腦神經膠質母細胞瘤細胞(G422)培養(yang) 說明書(shu)