儲存條件：-70℃保存，避免反複凍融。

組成 YBC102-01 BC102-02

DH5α Competent cells 10×100µl 20×100µl pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl

產(chan) 品介紹：

本公司生產(chan) 的 DH5α感受態細胞是采用大腸杆菌 DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用於(yu)

DNA 的化學轉化。使用 pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 108 cfu/µg，-70℃保存幾個(ge) 月轉化效率不發生改變。每支感受態可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質量穩定，使用方便，質優(you) 價(jia) 廉。

基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

產品特點：

一種用於(yu) 鋪製與(yu) 培養(yang) 質粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑製型株。其φ80 lacZΔM15 基因的產(chan) 物可與(yu) pUC

載體(ti) 編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用於(yu) 藍白斑篩選。操作步驟（以下操作均按無菌條件的標準進行）：

提示

u 感受態細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態細胞的轉化效率。

u 進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

u 為(wei) 防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到低。

1. 取感受態細胞置於(yu) 冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置於(yu) 冰浴中。

（一次轉化感受態細胞的建議用量為(wei) 50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA 體(ti) 積不要超過感受態細胞懸液體(ti) 積的十分之一。以下實驗以 100μl 感受態細胞為(wei) 例。）

2. 向感受態細胞懸液中加入目的 DNA ，輕輕旋轉離心管以混勻內(nei) 容物，在冰浴中靜置 30 分鍾。

將離心管置於 42℃水浴中放置 60 秒，然後快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻 2 分鍾，該過程不要搖動離心管。（此步驟也可將離心管置於室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放置 5-8 分鍾左右；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鍾左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）

4. 向每個(ge) 離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yang) 基（不含抗生素），混勻後置於(yu) 37℃ 150rpm，搖床振蕩培養(yang) 60 分鍾，目的是使質粒上相關(guan) 的抗性標記基因表達，使菌體(ti) 複蘇。

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應抗生素的 LB 固體(ti) 培養(yang) 基平板上，用無菌的細菌塗布器或玻璃珠將細胞均勻塗開。等平板中的液體(ti) *吸收後，倒置平板，37℃培養(yang) 12-16 小時。（塗布用量可根據具體(ti) 實驗來調整。轉化質粒在 10ng 左右，90mm 平皿塗布 100µl，55mm 平皿塗布 50µl；連接產(chan) 物的轉化菌液建議離心後倒掉大部分上清，餘(yu) 200µl，取 100µl 用於(yu) 塗布。）

6. 保留剩餘(yu) 的菌液於(yu) 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決(jue) 定去留。

（質粒快速轉化步驟：將步驟 2 的時間縮短到 5 分鍾，對於(yu) 氨苄青黴素抗性的質粒，步驟 3 完成後，可直接塗布或劃線於(yu) 含氨苄青黴素抗性的LB 平板上。其它抗性的質粒仍需 60 分鍾的複蘇培養(yang) 。）

儲存條件：-70℃保存，避免反複凍融。

組成 YBC102-01 BC102-02

基因型：

產品特點：

提示

相關試劑及培養基的製備方法：

楊小姐

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