一，酶標醋酸纖維膜免疫電泳技術的原理

由於(yu) 醋酸纖維膜是由醋酸纖維素組成的，對蛋白質分子的移動幾乎無阻力，差不多所有在電場中能泳動的物質均能在醋酸纖維膜裏自由移動，因此在免疫電泳中，醋酸纖維膜是一優(you) 良的載體(ti) 。將酶標記抗體(ti) 與(yu) 相應抗原在醋酸纖維膜進行電泳，生成複合物，用酶底物顯色，能大幅度地提高檢測的靈敏度和可靠性。使用酶標醋酸纖維膜免疫電泳技術（Enzyme-Linked-Cellulosa-Acetate-membrane-Immunoelectropheresis,簡稱ELCAIE），筆者文章公布的檢出量是0.3ng的RMV，其實當時的實驗結果已經顯示0.1ng的RMV檢測量。

二，酶標醋酸纖維膜免疫電泳技術的程序（檢測RMV）

1,器材與(yu) 設備

（1）電泳儀(yi) （包括電泳槽）；

（2）醋酸纖維膜（10cm×14cm,厚度10dmm；

（3）微量進樣器；

（4）竹鉗。

2，材料與(yu) 試劑

（1）       以0.2mol/LpH7.2硼酸緩衝(chong) 液連續稀釋的RMV溶液（10ng/ml→1×10⒌ng/ml）；

（2）       HRP標記的RMV免疫的兔IgG（戊二醛一步法交聯）；

（3）       洗滌液，每1000ml中有500ml 0.1mol pH8.2巴比妥緩衝(chong) 液和85g食鹽，其餘(yu) 為(wei) 蒸餾水；

（4）       底物與(yu) 供氫體(ti) 溶液（H2O2和DAB－4HC1）；

（5）       0.1mol/L pH8.6巴比妥鈉鹽酸緩衝(chong) 液。

 3，實驗程序

（1）       將醋酸纖維膜用軟鉛筆輕輕劃好點樣線，酶標抗體(ti) 樣點距膜邊3cm,抗原樣點與(yu) 酶標抗體(ti) 樣點對距3cm,兩(liang) 個(ge) 樣點橫距1.5cm.

（2）       將上述薄膜浸入0.1mol/L pH8.6巴比妥鈉鹽酸緩衝(chong) 液中浸濕，取出薄膜，用濾紙吸去表麵水分，但不要幹燥。

（3）       用微量進樣器點樣，抗體(ti) 每樣點用酶標抗體(ti) 液10ul,抗原樣點*點是對照，滴加10ul健青菜蛋白溶液；第二、三、四、五樣點滴加RMV抗原溶液各10ul,濃度分別為(wei) 1×10⒌ng/ml、1×10⒋ng/ml、1×10⒊ng/ml、100ng/ml；第六、七樣點分別滴加5ul、3ul、，濃度為(wei) 100ng/ml；第八樣點滴加10ul,濃度為(wei) 10ng/ml；第九樣點滴加5ul,濃度為(wei) 10ng/ml.

（4）       點樣完畢，將薄膜置於(yu) 電泳槽中央棱邊，使其架空，然後用濾紙作鹽橋，電泳緩衝(chong) 液為(wei) 0.1mol/L PH8.6巴比妥鈉鹽酸緩衝(chong) 液，抗原端接負極。

（5）       待作為(wei) 鹽橋的濾紙全部濕潤後，接通電源，控製電壓150V，電泳時間1.5h左右。

（6）       電泳完畢，將薄膜浸洗在洗滌中過夜。

（7）       次日將薄膜在清水中漂洗3－5min後取出。

（8）       zui後滴加H2O2（0.3%）和DAB－4HC1溶液，各占一半量，幾分鍾內(nei) 就會(hui) 顯示結果。