超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）試劑盒說明書(shu)

可見分光光度法

測定意義(yi) ：

SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，催化超氧化物陰離子 發生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅(jin) 是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成 酶，在生物抗氧化係統中具有重要作用。

測定原理：

通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應係統產(chan) 生超氧陰離子(O^2-.)，O^2-.可還原氮藍四唑生成藍色甲臢，後者在 560nm 處有吸收；SOD 可清除 O^2-.，從(cong) 而抑製了甲臢的形成；反應液藍色越深， 說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。

需自備的儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計、台式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配製：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：15mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存，用時加入27ml蒸餾水，充分搖勻懸濁液；

試劑三：液體(ti) 175μL×1 支，4℃保存；(與(yu) 蒸餾水1：1稀釋後再使用)

試劑四：液體(ti) 10mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的製備： 細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wan) 細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重複 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 560nm，蒸餾水調零。

2、測定前將試劑一、二和四 37℃（哺乳動物）25℃（其他物種）水浴 5min 以上。

3、樣本測定（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

充分混勻，室溫靜置 30min 後，加入 1mL 玻璃比色皿，560nm 處測定各管吸光值 A。

注意事項：

1、試劑三為(wei) 酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管隻需要做一管。

SOD 活性計算：

1、抑製百分率的計算

抑製百分率＝(A 對照管－A 測定管) ÷A 對照管× 100%

盡量使樣本的抑製百分率在 30-70%範圍內(nei) 。如果計算出來的抑製百分率小於(yu) 30%或大於(yu) 70%，則通常需要調整加樣量後重新測定。如果測定出來的抑製百分率偏高，則需將樣本用 提取液適當稀釋；如果測定出來的抑製百分率偏低，則需重新準備濃度比較高的待測樣本。 2、SOD 酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯反應體(ti) 係中抑製百分率為(wei)  50%時，反應體(ti) 係 中的 SOD 酶活力定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位(U/mL)。

3、SOD 酶活性計算：

（1）血清（漿）SOD 活性(U/mL)=[抑製百分率÷(1－抑製百分率)×V 反總]÷V 樣×樣本稀釋倍數=11.4×抑製百分率÷(1－抑製百分率)×樣本稀釋倍數

（2）組織、細菌或培養(yang) 細胞 SOD 活力計算：

a.按樣本蛋白濃度計算

SOD 活性(U/mg prot)=[抑製百分率÷(1－抑製百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr)×樣本稀釋倍數

=11.4×抑製百分率÷(1－抑製百分率)÷Cpr×樣本稀釋倍數 需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

b.按樣本鮮重計算

SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑製百分率÷(1－抑製百分率)×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋 倍數=11.4×抑製百分率÷(1－抑製百分率)÷W×樣本稀釋倍數

c.按細菌或細胞個(ge) 數計算

SOD 活力(U/10⁴ cell)=[抑製百分率÷(1－抑製百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋 倍數=0.0228×抑製百分率÷(1－抑製百分率)×樣本稀釋倍數

V 反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，1.026mL；V 樣：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.09mL；V 樣總： 加入提取液體(ti) 積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL ；W：樣本質量，g；500：細胞或 細菌總數，500 萬(wan)