羥自由基清除能力測定試劑盒說明書(shu)

可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

羥自由基作用於(yu) 體(ti) 內(nei) 蛋白質、核酸、脂類等生物分子，造成細胞結構和功能受損，進而導致體(ti) 內(nei) 代謝紊亂(luan) 引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一，在抗氧化類

保健品和藥品研究中得到廣泛應用。

測定原理

H₂O₂/ Fe²⁺通過Fenton 反應產(chan) 生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe²⁺水溶液中 Fe²⁺氧化為(wei) Fe³⁺，導致 536nm吸光度下降，樣品對536nm吸光度下降速率的抑製程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。

自備實驗用品

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 50 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體(ti) 20 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體(ti) 5 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體(ti) 5 mL×1 瓶，4℃保存。

樣品的製備

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然後 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清、果汁等液體(ti) 樣品可直接測定。

3. 提取物（或者藥物）可配製成一定濃度，如 5 mg/mL。

操作步驟

注意：空白管和標準管隻需測定一次。

計算公式

羥自由基清除率 D% =（OD測定管- OD對照管）÷（OD空白管-OD對照管）×100%

注意事項

為(wei) 了比較不同樣品羥自由基清除能力，對於(yu) 同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體(ti) 樣品加入同樣體(ti) 積，提取物（或者藥物）配製成同樣濃度。