維生素E（Vitamin E，VE）試劑盒說明書(shu)

分光光度法 50 管/24 樣
注意：正式測定之前選擇2-3 個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。
測定意義(yi)
維生素E（Vitamin E）是一種脂溶性維生素，其水解產(chan) 物為(wei) 生育酚，是生物體(ti) 中主要的抗
氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷(shang) ，維持不飽和脂肪酸細胞膜的完整
性和正常功能，具有延緩衰老、預防溶血性貧血作用，在醫藥、化妝品、保健品、食品行業(ye)
具有較高的應用價(jia) 值。
測定原理
VE 還原Fe3+為(wei) Fe2+，Fe2+與(yu) 1,10-菲羅啉產(chan) 生有色絡合物，在530nm 有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀(yi) 器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿、漩渦震蕩儀(yi) 。
試劑組成和配製
提取液：液體(ti) 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體(ti) 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體(ti) 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體(ti) 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體(ti) 15mL×1 瓶，4℃保存。
樣本處理
1. 組織：按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10 的比例（建議稱取約0.2g，加入1mL
提取液）加入提取液，充分勻漿後用提取液定至2mL，在漩渦混勻儀(yi) 上震蕩5min，於(yu)
25℃，5000g 離心10min，取上層測定。
2. 細胞：按照細胞數量（104 個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議1000
萬(wan) 細胞加入2mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3 秒，間隔7 秒，
總時間3min）；在漩渦混勻儀(yi) 上震蕩5min，於(yu) 25℃，5000g 離心10min，取上層測定。
3. 血清：取0.2mL，加1.9mL 提取液，漩渦儀(yi) 混勻上震蕩5min，於(yu) 25℃，5000g 離心10min，
取上層測定。
測定操作
對照管 測定管
樣品（μL） 500 500
試劑一（μL） 100 100
試劑二（μL） 100
試劑三（μL） 100
充分混勻，25℃反應5min
試劑四（μL） 300 300
充分混勻，於(yu) 1mL 玻璃比色皿，無水乙醇調零，測定530nm 處吸光值，記為(wei) A
對照管和A 測定管，△A=A 測定管-A 對照管。
計算公式
標準曲線：y = 0.022x + 0.0065， R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計算
VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反總÷（V 樣×Cpr）
= 181.8×（△A -0.0065）÷ Cpr
2. 按照樣本質量計算
VE含量（μg/g）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V反總÷（V樣×W÷V樣總）
= 181.8×（△A -0.0065）÷ W
3. 按照細胞數量計算
VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）
= 181.8×（△A -0.0065）÷ 細胞數量
4. 按照液體(ti) 體(ti) 積計算
VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V反總÷V樣×20
= 1818×（△A -0.0065）
V反總：反應總體(ti) 積，1mL；：V樣：加入樣本體(ti) 積，0.5mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，2mL； Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g
注意事項
1. 若反應體(ti) 係產(chan) 生沉澱，需要將樣品進行適當的稀釋，並在計算公式中乘以稀釋倍數。
2. 低檢出限為(wei) 29.5μg/g。