BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書(shu)  

微量法

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定，確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內(nei) 。

貨號：YX-W-C202

規格：100T/96S

產(chan) 品內(nei) 容：

試劑A：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。 

試劑B：液體(ti) ×1支，4℃保存。 

標準品：液體(ti) ×1支，4℃保存。 

產(chan) 品說明：

樣品可溶性蛋白質含量常常用於(yu) 酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用於(yu) 食品等質量分析。 測定原理： 堿性條件下，蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與(yu) Cu+結合，生成紫色絡合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰ZUI強。 自備儀(yi) 器和用品： 

台式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。 

工作液配製：臨(lin) 用前請根據擬用工作液體(ti) 積（樣本數×0.2mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊後充分混勻。 

操作步驟：

一、樣品中可溶性蛋白質提取： 

1. 液體(ti) 樣品：澄清液體(ti) 樣品可以直接測定。 

2. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據需要選用酶提取緩衝(chong) 液或者蒸餾水或者生理鹽水），冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋） 

3. 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後10000rpm，4℃，離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。 

二、測定操作： 

1. 可見分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30min，調節波長到562 nm，蒸餾水調零。

• 工作液置於60℃水浴預熱30 min。

注意：空白管和標準管隻需要做一次。 

三、計算公式： 

Cpr (mg/mL)= C標準品×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管） 

=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）

注意事項：

• BCA 法蛋白含量測定試劑盒，適用於測定蛋白濃度在20-2000μg/ml 樣品。測定前取1-2 個樣做預實驗，樣品蛋白含量太高的話，請稀釋至相應濃度範圍內，以確保測定的準確性。 
• 待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或PBS 提取。 
• 由於受測定溫度及時間等的影響，請嚴格按照給定條件測定。

本產(chan) 品僅(jin) 供科學研究使用！請勿用於(yu) 臨(lin) 床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！