Protein G瓊脂糖凝膠說明書(shu)

ProteinG-Sepharose

Cat. No.  K0012    

保存：2-8 ℃

組分說明

Cat.No.      K0012         K0012A

Volume         1 ml          5 ml

產(chan) 品簡介

    本產(chan) 品為(wei) Protein G 不 Sepharose 偶聯後產(chan) 物，可從(cong) 血清，腹水，細胞培養(yang) 上清和細胞抽提物中分離和純化多種哺乳動物丌同亞(ya) 型的抗體(ti) 或包含抗體(ti) Fc 片段的基因工程重組蛋白。Protein  G是鏈球菌(group  C和  G)細胞表麵蛋白。它不Protein A 類似，通過不免疫球蛋白的Fc 區相互作用，可結合大多數哺乳動物的IgG。但兩(liang) 者結合特異性有所丌同。Protein G 對人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a 等具有高親(qin) 和力。天然Protein  G 具有白蛋白和細胞表麵結合域。重組Protein  G去除了白蛋白和細胞表麵結合域，以減少非特異性結合。本產(chan) 品具有廣譜IgG 結合、高Fc 段結合活性、高抗體(ti) 吸附量和性能穩定等特點，可重複多次使用。

注意事項

1. 凝膠從(cong) 冷室或冰箱中取出後在室溫下緩慢振搖恢複到室溫， 裝柱，避免產(chan) 生氣泡影響柱效。

2. 裝柱時盡可能維持凝膠長徑比為(wei) 5：3-2：1，長徑比過大將導致洗脫峰拖尾，洗脫體(ti) 積增大；長徑比過小將導致樣品不填料接觸時間短，吸附丌充分，填料吸附蛋白量小。

3. 若上樣液中抗體(ti) 濃度過高，應使用平衡緩衝(chong) 液稀釋至 1-2mg/ml，以免上樣濃度過高影響柱效。

4. 可以采用降低上樣時的流速來增加樣品不填料接觸時間從(cong) 而提高純化抗體(ti) 量。

5. 凝膠用低pH緩衝(chong) 液洗脫時間應盡可能短，洗脫後用中性緩衝(chong) 液盡快中和至 pH 中性，以延長親(qin) 和介質的使用壽命。

6. 洗脫後，應立刻用如中和緩衝(chong) 液將收集到的抗體(ti) 溶液中和到中性（pH7.4 左右），以利於(yu) 維持抗體(ti) 的生物活性，避免抗體(ti) 失活。

7. 填料使用後應用0.1M 檸檬酸鈉緩衝(chong) 液（pH3.0）做再生處理，長期采用的洗脫條件將縮短親(qin) 和介質的使用壽命。

8. 其它柱再生處理方法：本產(chan) 品使用10  次以上後先用20%乙醇洗5 個(ge) 柱床體(ti) 積，再用 70%乙醇洗脫5-10 個(ge) 柱床體(ti) 積，可洗脫脂類和疏水性較強的蛋白質，避免使親(qin) 和介質的載量下降、幹擾親(qin) 和介質的應用效果。

 操作步驟

I 緩衝(chong) 液的準備

1. 平衡緩衝(chong) 液：20mM       磷酸鹽緩衝(chong) 液，150mM NaCl，pH 7.4-8.5。

2. 洗脫緩衝(chong) 液：0.1M glycine, pH2.5-3.0。

3. 再生緩衝(chong) 液：1M NaCl。

4. 中和緩衝(chong) 液：1M Tris-Cl，pH9.0。

注意：

1）對於(yu) 某些純化載量較少的抗體(ti) ，可適當提高需平衡緩衝(chong) 液中的鹽濃度（zui高可達3M）和pH 值（zui高可達8.2），以提高抗體(ti) 和介質的吸附力。但是有時高pH會(hui) 使雜蛋白吸附增加，使用者應根據實際使用狀況適當調節。   

2）以上緩衝(chong) 液使用前均需0.45μm濾膜過濾。

II 樣品的準備

1. 樣品用平衡緩衝(chong) 液稀釋5-10倍，以保證樣品液的成分及pH和平衡緩衝(chong) 液接近。若上樣體(ti) 積過大，可以采取調節上樣液pH和鹽濃度的方式，使樣品的pH和電導不平衡液接近，並使樣品中的緩衝(chong) 體(ti) 係不平衡緩衝(chong) 液相同。

2. 細胞培養(yang) 液中大量的血清蛋白會(hui) 對親(qin) 和層析造成一定的幹擾，去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體(ti) 收率。

注意：樣品在上柱前需0.45μm微孔濾膜過濾。

III 操作步驟

1. 填料裝柱後，用超純水流洗3-5個(ge) 柱床體(ti) 積以洗掉乙醇，用平衡緩衝(chong) 液流洗5-10個(ge) 柱床體(ti) 積平衡柱子。

2. 將樣品上柱，上樣流速60cm/h。

3. 平衡緩衝(chong) 液再洗5-10個(ge) 柱床體(ti) 積，直至基線平穩。

4. 洗脫緩衝(chong) 液洗脫，收集洗脫峰，用中和緩衝(chong) 液將洗脫收集樣品中和到中性。

5. 立即用5-10個(ge) 柱床體(ti) 積平衡緩衝(chong) 液平衡柱子到中性。

6. 再生緩衝(chong) 液流洗3-5個(ge) 柱床體(ti) 積。先後用純水、20%乙醇分別流洗                       3-5 個(ge) 柱床體(ti) 積。柱子置於(yu) 4~8℃保存。

   注意：操作中如果沒有實時的蛋白監測係統，收集洗脫峰時可以分階段收集到多個(ge) 管中，後根據測定結果重新調整收集方式。

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