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小鼠畸胎瘤細胞(P19)
點擊次數:1864 更新時間:2020-06-29

 小鼠畸胎瘤細胞P19

 

細胞介紹

加拿大渥太華大學的Mc Burney 等在1982 年從(cong) 雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的 , 是一種能夠在體(ti) 外培養(yang) 的多能幹細胞, P19 細胞團經RA 誘導可分化成神經元、膠質細胞和纖維母細胞; 而經二甲基亞(ya) 碸(DM SO ) 誘導則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;在P19細胞向神經元分化的過程中,神經發育相關(guan) 基因的表達模式基本模擬了正常小鼠神經發育過程, 因此, P19 目前被用作一個(ge) 研究神經發育的體(ti) 外模型。P19 細胞作為(wei) 研究神經分化機製的模型, 顯著區別於(yu) 其他細胞係的四大特點是: 它具有正常小鼠的二倍體(ti) 核型, 細胞分裂快, 可在體(ti) 外迅速大量擴增, 多次傳(chuan) 代也不喪(sang) 失其分化能力。P19 細胞具有多種分化潛力, 不同誘導條件下可定向分化成不同類型的細胞, 種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細胞。根據P19 細胞誘導分化分階段進行的特點, 能將神經分化的早期機製與(yu) 參與(yu) 突起延伸的機製分開研究。該細胞易於(yu) 轉染, 且轉染後仍能正常分化, 適於(yu) 進行細胞基因研究。通過轉染正常或突變的目的基因, 增強或抑製它們(men) 的表達水平可用於(yu) 研究這些基因在神經分化中的作用。另外, 利用反義(yi) RNA 阻斷內(nei) 源蛋白的表達, 可用來觀察這些蛋白在神經分化中的作用。

(references:1.張金平等. 全反式維甲酸體(ti) 外誘導P19細胞向心肌方向分化.[J]中國組織化學與(yu) 細胞化學雜誌.2012.1 2.梅宇欽. 建立經優(you) 化的促P19鼠胚胎癌細胞神經分化模型.浙江大學學報(醫學版2012.04)

細胞特性

1) 來源:胚胎;畸胎癌

2) 形態上皮細胞

3) 含量:>1x106

4) 汙染:支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存:可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式:1幹冰運輸,收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇;2存活細胞收到後應繼續生長傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

收到細胞後請拍照,3天內(nei) 如果發現汙染,請及時拍照與(yu) 我們(men) 聯係。

細胞用途:僅(jin) 供科研使用。

細胞接收後的處理:

1) 收到細胞後,請檢查發貨培養(yang) 瓶的狀況,若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染,請拍照後及時聯係我們(men) 。

2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,hao在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳(chuan) 代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存,作為(wei) 細胞需要售後時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3) 觀察好細胞狀態後,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h。

4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會(hui) 有脫落的現象,如發現貼壁細胞有脫落或者脫落後抱團生長,可將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h,然後抽出瓶中的培養(yang) 基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鍾,棄去上清重懸後接種到加有按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基的原培養(yang) 瓶中(或新的培養(yang) 瓶中)。

5) 懸浮細胞:T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h,然後抽出瓶中的培養(yang) 基和細胞1000rpm離心5分鍾,棄去上清重懸後接種到新的培養(yang) 瓶中(加入按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基)。

6)備注:運輸用的培養(yang) 基(灌液培養(yang) 基)不能再用來培養(yang) 細胞,請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第yi次傳(chuan) 代建議1:2傳(chuan) 代 。                      

細胞培養(yang) 步驟

一.培養(yang) 基培養(yang) 凍存條件準備:

1) 準備MEMα(推薦iCell-0003)養(yang) 基優(you) 質胎牛血清,2.5%;小牛血清,7.5%雙抗,1%注:該細胞隻單使用一種血清培養(yang) ,不能保證細胞狀態。

2) 培養(yang) 條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3) 凍存液90%血清,10%DMSO現用

二. 細胞處理

1) 複蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養(yang) 基,培養(yang) 過夜)。第二天換液並檢查細胞密度。

2) 細胞傳(chuan) 代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳(chuan) 代培養(yang)

對於(yu) 貼壁細胞,傳(chuan) 代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yang) 上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於(yu) 培養(yang) 瓶中,置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾,然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓並脫落,迅速拿回操作台,輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基,輕輕打勻後吸出,在1000RPM條件下離心4分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中

yi次傳(chuan) 代推薦傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2,以後傳(chuan) 代比例可根據客戶需要自己決(jue) 定。

3)細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存

下麵T25瓶為(wei) 類;

      1,細胞凍存時,棄去培養(yang) 基後,PBS清洗一遍後加入1ml胰酶,細胞變圓脫落後,加入1ml血清的培養(yang) 基終止消化,可使用血球計數板計數。

      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為(wei) 10%,細胞密度不低於(yu) 1x106/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

      3,將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項:

1. 收到細胞後,若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染,請立即與(yu) 我們(men) 聯係

2. 所有動物細胞均視為(wei) 潛在的生物危害性必須在二級生物安全內(nei) 操作,並請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。

 

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