BCA蛋白定量試劑盒說明書(shu)

BCA Protein Assay Kit

BCA蛋白定量試劑盒

目錄號：K0014

保存條件：BSA標準品2-8℃保存，其它組分室溫保存。

組分說明

            Cat. No.                             K0014

            Kit Size             500 次/微孔，50 次/試管

            試劑  A                                 100 ml

            試劑  B                                  3 ml

            BSA 標準品 （2mg/ml）                       2 ml

               本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途  

產(chan) 品簡介

　　BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chan) 品是基於(yu)  BCA（Bicin

-choninic   Acid）法研製而成，實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其

原理是在堿性環境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與(yu) Cu²⁺絡合生成絡合物，同時將Cu²⁺還

處原成有高的光吸收Cu⁺。BCA試劑值，可敏感特異地與(yu) 顏色的深淺與(yu) 蛋白Cu結質濃合，形成度成正比，可根據吸收穩定的有顏色的複值合物。在的大小來562測 定蛋nm

白質的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白（ BSA）溶液作為(wei) 蛋白質標準品溶液，測定

範圍為(wei) 20～2000 μg/ml。

注意事項

1．本產(chan) 品可以采用分光光度計（試管檢測法）或者酶標儀(yi) （微孔檢測法）測定蛋白濃度。

2．建議每次測定蛋白樣品時，繪製標準曲線，以獲得準確數據。

3．BSA標準品的稀釋液需與(yu) 待測樣品的稀釋液一致（可用1×PBS或0.9%生理鹽水進行

   稀釋）。

4．完成37℃孵育30分鍾或室溫孵育2小時後，須在3-5分鍾內(nei) 完成檢測，否則會(hui) 影響蛋

   白定量的準確度。

5．如待測樣品中含較多的幹擾物質（具體(ti) 見附表1），可采用Bradford法蛋白定量試劑

   盒（K0013）或其他蛋白定量產(chan) 品。

操作步驟

1．稀釋BSA標準品：用與(yu) 待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標準品。

管號      稀釋液用量（μl）  BSA標準品用量（μl）   BSA標準品終濃度（μg/μl）

A                0                100                       2

B               200               200                       1

C               200         200（從(cong) B管中取）               0.5

D               200         200（從(cong) C管中取）               0.25

E               200         200（從(cong) D管中取）              0.125

F               200         200（從(cong) E管中取）              0.0625

G               200                0                       0（空白）

2．配置BCA工作液：

   1）計算BCA工作液總量：                      

   BCA工作液總量=（BSA標準品樣本個(ge) 數+未知樣本個(ge) 數）×複孔數×每個(ge) 樣本BCA工作液體(ti) 積

   舉(ju) 例：BSA標準品樣本個(ge) 數為(wei) 7個(ge) ，未知樣本個(ge) 數2個(ge) ，複孔數3個(ge) 。

   試管檢測法：

   BCA工作液總量=(7個(ge) BSA標準品樣本+2個(ge) 未知樣本)×3個(ge) 複孔×2 ml/每個(ge) 樣本工作液體(ti) 積=54 ml

   微孔檢測法：

   BCA工作液總量=(7個(ge) BSA標準品樣本+2個(ge) 未知樣本)×3個(ge) 複孔×200 μl/每個(ge) 樣本工作液體(ti) 積=5.4ml

   2）根據計算出的BCA工作液需要總量，將試劑A和試劑B按照50：1的體(ti) 積比，配製

   BCA工作液，充分混勻。

   注意：1）由於(yu) 加樣可能存在誤差，建議配製BCA工作液時，多配製1-2個(ge) 孔。

   2）新配製的BCA工作液室溫密封條件下可穩定保存24小時。

3．定量檢測

3a.試管檢測法（蛋白濃度檢測範圍：20-2000 μg/ml）

   1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各100 μl

   分別加到作好標記的試管中。推薦每個(ge) 測定的樣本做2-3個(ge) 平行反應。

   2）向每個(ge) 試管中各加入2 ml BCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鍾或室

   溫孵育2小時。

   3）將各管冷卻至室溫。

   4）用分光光度計在562 nm處測定每個(ge) 樣品及BSA標準品的吸光值，同時做好記錄。

   5）繪製標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

3b.微孔檢測法（蛋白濃度檢測範圍：20-2000 μg/ml）

   1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各25 μl分

   別加到作好標記的96孔板微孔中。推薦每個(ge) 測定的樣本做2-3個(ge) 平行反應。

   2）每孔加入200 μl BCA工作液，充分混勻，蓋上96孔板蓋，37℃孵育30分鍾。

   3）冷卻至室溫。

   4）用酶標儀(yi) 在540-590 nm範圍內(nei) ，測定每個(ge) 樣品及BSA標準品吸光值，做好記錄。

   5）繪製標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

   注意：1）BCA法測定蛋白濃度時，吸光值會(hui) 隨著時間的延長不斷加深。因此所有樣品測定需在3-5 分鍾內(nei) 完成，否則會(hui) 影響蛋白定量的準確度。

   2）建議以去除背景值後的吸光值讀數繪製標準曲線。

   3）由於(yu) 操作誤差導致標準品讀數嚴(yan) 重偏離線性曲線的應舍去。

   4）未知樣品濃度可以從(cong) 標準曲線方程中計算得出, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。

   5）如果得到的蛋白濃度不在檢測範圍內(nei) ，請重新稀釋樣品後再次測定。

    4．BCA蛋白定量分析結果舉(ju) 例：

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