微量BCA蛋白定量試劑盒說明書(shu)

MicroBCAProteinAssayKit                                                            

微量BCA蛋白定量試劑盒

Cat.No.  K2011                       

保存：BSA 標準品：2-8℃

其 它 組分：室溫

組分說明



Catalogno.                       K2011

Volume                            120ml

MicroBCAReagentA （MA）               120ml

MicroBCAReagentB （MB）               120ml

MicroBCAReagentC （MC）                6ml

BSA （2mg/ml）                             2ml

產(chan) 品簡介

      BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chan) 品是基於(yu) BCA（BicinchoninicAcid）法研製而成，實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與(yu) Cu²⁺絡合生成絡合物，同時將 Cu ²⁺ 還原成 Cu ⁺BCA 試劑可敏感特異地與(yu) Cu⁺結合，形成穩定的有顏色的複合物。在562nm 處有高的光吸收值，顏色的深淺與(yu) 蛋白質濃度成正比，可根據吸收值的大小來測定蛋白質的含量。本試劑盒專(zhuan) 為(wei) 低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設計，可精*&確測定濃度為(wei) 2.5-200 μg/ml 的蛋白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測量差異極低。本試劑同多種非離子型去汙劑有較好的相容性。

注意事項 

 1.  BSA 標準品的稀釋液需與(yu) 待測樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋）。

 2.  操作中請佩戴手套。

 3.  本產(chan) 品僅(jin) 限科研使用。

 操作步驟

 1.  稀釋 BSA 標準品：用與(yu) 待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。

 

管號     稀釋液用量（μl）   標準品用量（μl）   終濃度（μg/ml）

 

A               360                40                    200

B               400         100（從(cong) A管中取）                 40

C               250         250（從(cong) B管中取）                 20

                                                      （從(cong)    管中取）

D               250         250    C                   10

E               250         250（從(cong) D管中取）                  5

 

F               250         250（從(cong) E管中取）                 2.5

 

G               250                0                  0(空白)

 

 2.  配製 MicroBCA 測試工作液：根據標準品和樣品的數量配製測試液。

試劑 MD 配製：4volumeMC+100volumeMB

測試工作液 WR 配製： 1volumeMA+1volumeMD

充分混勻後待用

 3.  試管及微板檢測（蛋白濃度檢測範圍：2.5-200 μg/ml）

    1）按上表準備好標準品及待測樣品。

    2）將蛋白樣品和測試工作液 WR 按照 1:1（體(ti) 積比）比例加入，充分混勻。在 60 度孵育 60 分鍾。

    3）孵育完成後冷卻到室溫，在 562nm 處讀取吸光度值。

    4）標準品與(yu) 待測樣品的吸光度值要扣除空白對照的吸光度值，然後進行濃度的計算。

    5）如果所得到的蛋白濃度不在檢測範圍內(nei) ，請重新稀釋樣品後再次測定。

 

附表

                             附表 1. 幹擾物質表

                                                        

化合物              耐受濃度               化合物              耐受濃度

                  緩衝(chong) 液                             去垢劑和變性劑

乙酸鹽                0.2M              Brij35             1%

甘氨酸                 1M              CHAPS               1%

HEPES              0.1M             鹽酸胍                 4M

MES              50mM              NP-40                  1%

MOPS              50mM              辛葡糖                 1%

Na+-檸檬酸             ＜1mM               SDS                1%

PIPES             50mM            Triton X-100              1%

磷酸鈉                0.1M              糖類

乙酸鈉             0.2M pH 5.5         葡萄糖               10mM

TES              50mM                    蔗糖                 1M

Tris             0.1M                      螯合劑

鹽類               EDTA                      10mM        還原劑

硫酸銨                                                     幹擾

NaCl               1M            β-巰基乙醇               50μM

尿素                 3M               DTT               1mM

極性化合物                                  其他

DMSO                5%               脂類                幹擾

甘油                10%            HCl/NaOH             0.1M

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