Easy-Lowry蛋白定量試劑盒說明書(shu)

Easy-Lowry Protein Assay Kit

Easy-Lowry蛋白定量試劑盒

目錄號：K2341

保存：BSA 標準品：2-8℃

其  它 組  分：室  溫

 組分說明

Cat. No.                    K2341

Kit Size                    1000 次/微孔，50 次/試管

試劑 A                        50 ml

試劑 B                        25 ml

BSA 標準品 （2 mg/ml）     2 ml

產(chan) 品簡介

    Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是一種操作簡便快捷的 Lowry 法蛋白定量試劑盒，可用於(yu) 多種不同緩衝(chong) 係統以及各種不同蛋白質的定量檢測。Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是在 Improved-Lowry 蛋白定量試劑盒基礎上進行優(you) 化改良的產(chan) 品，其保留了Improved-Lowry 抵抗幹擾能力較強的優(you) 點，並進一步簡化了操作步驟，減少了檢測時間，並且能得到與(yu) mproved-Lowry 蛋白定量接近的定量結果，其檢測範圍為(wei) 0-2000 μg/ml。

 注意事項

  1.  本產(chan) 品可以采用分光光度計（試管檢測法）或者酶標儀(yi) （微孔檢測法）測定蛋白濃度。

 2.  建議每次測定蛋白樣品時，繪製標準曲線，以獲得準確數據。

 3.  BSA 標準品的稀釋液需與(yu) 待測樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水稀釋）。

 4.  如待測樣品中含較多的幹擾物質（具體(ti) 見附表 1），可采用 Bradford 法蛋白定量試劑盒（K0013）或其他蛋白定量產(chan) 品。  

 操作步驟

 1.  稀釋 BSA 標準品：用與(yu) 待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。

管號        稀釋液用量（μl）BSA標準品用量（μl）   BSA標準品終濃度（μg/μl）

A                  0                 200                       2

B                 200                200                       1

C                 200          200（從(cong) B管中取）               0.5

D                 200          200（從(cong) C管中取）              0.25

E                 200          200（從(cong) D管中取）              0.125

F                200                 0                         0（空白）

 2.  稀釋試劑 B：將試劑 B 用去離子水稀釋 8 倍混勻待用。

 3.  定量檢測：

 3a.  試管檢測法（蛋白濃度檢測範圍：0-2 μg/μl）

    1）按上表，將稀釋好的 A-F BSA 標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各 200 μl  分別加到作好標記的試管中。

    2）向各試管中加 1 ml 試劑 A 迅速振蕩混勻，室溫準確放置 10 分鍾。

    3）向各試管中加入 4 ml 稀釋過的試劑 B，迅速在渦旋儀(yi) 上混勻，室溫靜置 30 分鍾。

    4）用分光光度計測定 750 nm 下的吸光度值。

    5）繪製標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

 3b.  微孔檢測法（蛋白濃度檢測範圍：0-2 μg/μl）

    1）按上表，將稀釋好的 A-F BSA 標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各 5 μl 分別加到作好標記的 96 孔板微孔中。

    2）向各微孔中加 50 μl 試劑 A，迅速用酶標儀(yi) 振蕩混勻，室溫準確放置 10 分鍾。

    3）向每孔中加入 200 μl 稀釋過的試劑 B，迅速用酶標儀(yi) 振蕩混勻，室溫靜置 30 分鍾。

    4）用酶標儀(yi) 測定 750 nm 下的吸光值。

    5）繪製標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

注意：

  1）建議以去除背景值後的吸光值讀數繪製標準曲線。

  2）由於(yu) 操作誤差導致標準品讀數嚴(yan) 重偏離線性曲線的應舍去。

  3）未知樣品濃度可以從(cong) 標準曲線方程中計算得出,  實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。

  4）如果得到的蛋白濃度不在檢測範圍內(nei) ，請重新稀釋樣品後再次測定。  

                          附表 1.幹擾物附表

    化合物               耐受濃度                化合物               耐受濃度

                          緩衝(chong) 液                               去垢劑及變性劑

    磷酸鉀                0.03 M           去氧膽酸鈉               0.0625%

    甘氨酸               0.25 mM             CHAPS              1 mM

    HEPES              2.5  μM            辛葡糖                 幹擾

     MES               25  μM              SDS               1.25%

    MOPS               25  μM          Triton X-100          0.25%

  Na +-檸檬酸                 2.5  μM          糖類

    PIPES              5  μM             葡萄糖               30 mM

    磷酸鈉               0.25  μM             蔗糖               10  μM

    螯合劑

      TES               1 mM

      Tris             250  μM             EDTA             125  μM

                           鹽類       EGTA               幹擾

                                                   還原劑

    硫酸銨                28  μM

     NaCl              30  μM           β-巰基乙醇              1.75mM

     尿素                200  μM             DTT              50  μM

                                                    其他

                          極性化合物

     丙酮                 1.25%            丙烯酰胺             1.25 mg/ml

    DMSO                6.20%              DNA            190  μg/ml

     乙醇                12.50%              脂類                25mM

1,2-亞(ya) 乙基二醇               0.25%           兩(liang) 性電解質                 幹擾

     甘油                  25%             中性 TCA           12.5 mg/ml

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