2×GoldStar Best MasterMix（含染料）說明書(shu)

 目錄號：K0655

保存條件：-20℃長期保存，如需頻繁使用，可存放於(yu) 2-8℃，盡量避免反複凍融。

組分說明

               Cat. No.                       K0655      K0655B

               Kit Size                         1 ml       5×1 ml

               2×GoldStar Best MasterMix        1 ml       5×1 ml

               RNase-Free Water                 1 ml       5×1 ml

           注意：2×GoldStar Best MasterMix含有GoldStar  Best DNAPolymerase,

                2×GoldStar Best PCR  Buffer, 3 mM MgCl2和400 µM  dNTPs。

產(chan) 品簡介

　　本品為(wei) 由GoldStar Best  DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg、dNTPs以及PCR

穩定劑和增強劑組成的預混體(ti) 係，濃度為(wei) 2×，具有操作簡便快速、靈敏度高、特異性2+

強、穩定性好的優(you) 點，可大限度地減少人為(wei) 誤差和汙染。該產(chan) 品所含的GoldStar

Best DNA Polymerase是經過特殊處理的熱啟動高保真聚合酶。該聚合酶具有5′-3′DNA

聚合酶活性， 5′-3′核酸外切酶活性和  3′-5′核酸外切酶活性，在普通   PCR條件下，與(yu) GoldStar Taq DNA Polymerase相比，具有擴增效率高、錯配率低的優(you) 良性能。化學修

飾使該酶在常溫下沒有聚合酶活性，有效避免在常溫條件下由引物和模板非特異性結

合或引物二聚體(ti) 而產(chan) 生的非特異性擴增，酶的激活須在 95℃下孵育10分鍾，該條件可

以整合入已有的PCR熱循環程序。優(you) 化的緩衝(chong) 體(ti) 係使酶的作用發揮大功效，實現對

目的片段的高保真、高特異性、高擴增效率、高靈敏度擴增。本產(chan) 品已加入染料（藍

色），反應結束後可直接進行電泳檢測，無需再使用上樣緩衝(chong) 液。擴增得到的  PCR產(chan)

物3′端附有一個(ge) “A”堿基，因此可直接用於(yu) T/A克隆。適用於(yu) 常規的PCR反應和對高保真性有要求的基因克隆等實驗。

質量控製

　　經檢驗無外源核酸酶活性； PCR方法檢測無宿主殘餘(yu) DNA；能有效地擴增多種基

因組中的單拷貝基因；2-8℃存放三個(ge) 月，活性無明顯改變。

                本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途

使用方法

    以下舉(ju) 例為(wei) 常規PCR反應體(ti) 係和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的

    片段大小不同進行相應的改進和優(you) 化。

    1. PCR反應體(ti) 係

              試劑                             50 μl反應體(ti) 係          終濃度

              2×GoldStar Best MasterMix          25 μl             1×

              Forward Primer，10 µM                2 μl           0.4 μM

              Reverse Primer，10 µM                2 μl           0.4 μM

              Template DNA                       <1 μg        <1 μg/reaction

              RNase-Free Water                 up to 50 μl

       注意：引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為(wei) 設定範圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(you) 化反應體(ti) 係。

    2. PCR反應條件

步驟                 溫度              時間

預變性                 95℃            10 min

變性                 94℃             30 s

退火               55-65℃            30 s     30-40個(ge) 循環

延伸                 72℃             60 s

終延伸                 72℃             5 min

注意：1）一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優(you) 化反應條件。

2）延伸時間應根據所擴增片段大小設定，本產(chan) 品中所包含的GoldStar Best DNA Polymerase的擴增效率為(wei) 1 kb/min。

3）可根據擴增產(chan) 物的下遊應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會(hui) 增加，非特異性背景嚴(yan) 重。所以在保證產(chan) 物得率的前提下應盡量減少循環次數。

4）本產(chan) 品須在預變性95℃，10 min條件下實現酶的活化。

3.結果檢測：本產(chan) 品已加入染料（藍色），反應結束後取5  µl反應產(chan) 物直接進行瓊脂糖

      凝膠電泳檢測，無需再使用上樣緩衝(chong) 液。

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