全血/組織/細胞基因組DNA快速提取試劑盒

Rapid Genomic DNA Kit

產品信息：

保存條件：本試劑盒在室溫儲(chu) 存 12 個(ge) 月不影響使用效果。RnaseA、蛋白酶 K

可室溫運輸，建議-20℃長期保存。

 產(chan) 品介紹：

*的結合液/蛋白酶 K 迅速裂解細胞和滅活細胞內(nei) 核酸酶，然後基因組DNA 在高離序鹽狀態下選擇性吸附於(yu) 離心柱內(nei) 矽基質膜， 再通過一係列快速的漂洗－離心的步驟， 抑製物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除， 後低鹽的洗脫緩衝(chong) 液將純淨基因組 DNA 從(cong) 矽基質膜上洗脫。

 產(chan) 品特點：

1.重複性好:離心吸附柱內(nei) 矽基質膜全部采用進口特製吸附膜，柱與(yu) 柱之間吸附量差異極小。克服了國產(chan) 試劑盒膜質量不穩定的弊端。

2 提取純度高，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值達 1.7～1.9，可直接用於(yu) PCR，Southern-blot和各種酶切反應。

3. 簡單快速，一小時內(nei) 即可獲得超純的基因組 DNA

4. 廣 泛：適用於(yu) 血液、多種動物細胞和動物組織等。

 注意事項：

1. 結合液 CB 或者抑製物去除液 IR 低溫時可能出現析出和沉澱，可以在 37℃水浴幾分鍾幫助重新溶解，恢複澄清透明後冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長時間暴露於(yu) 空氣中產(chan) 生揮發、氧化、pH 值變化。

3. 結合液 CB 和抑製物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水衝(chong) 洗。

4. 洗脫液 EB 不含有螯合劑EDTA，不影響下遊酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫， 但應該確保批pH 大於(yu) 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA 應該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩衝(chong) 液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下遊酶切反應，使用時可以適當稀釋。

自備試劑：無水乙醇

操作步驟：

提示：第-次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指#*定量無水乙醇，充分混勻，加入後請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

1. 處理材料

a. 血液

如提取材料為(wei) 血液，可直接使用220μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足

220µl用緩衝(chong) 液BB補足220µl，振蕩混勻。

注意：如需處理更大體積血液，如300μl-1ml，應按以下步驟操作：在樣品中加入 3 倍體積紅細胞裂解液 （例如，300μl血液加入900μl紅細胞裂解液），顛倒混勻， 室溫放置5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000rpm離心1 min（若離心 機*#高轉速不允許，也可3000rpm離心5 min，吸去上清，留下白細胞沉 澱，加220μl緩衝液BB， 振蕩至*混勻。 紅細胞裂解液本公司另外有售，可根據需要來決定購買。

b.  如果處理血樣為(wei) 禽類、鳥類、兩(liang) 棲類或更低級生物的抗凝血液，其紅細胞為(wei) 有核細胞，因此處理量 5-20μl，可加緩衝(chong) 液 BB 補足 220μl 後進行下麵的裂解步驟。

c. 貼壁培養(yang) 的細胞應先處理為(wei) 細胞懸液，然後 10,000rpm 離心 1 min，棄上清，加 220μl

緩衝(chong) 液BB，振蕩至*懸浮；

d. 動物組織（脾組織用量應少 10mg）應先打碎處理為(wei) 細胞懸液，然後 10,000rpm

離心 1 min，倒盡上清，加 220μl 緩衝(chong) 液 BB，振蕩至*懸浮。

2. 提取組織培養(yang) 細胞和動物組織DNA時為(wei) 清除RNA，加入5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻，室溫放置5 min。

3. 加入20µl蛋白酶K，振蕩混勻，置於(yu) 55℃水浴中消化處理。

a. 提取血液基因組時，隻需加入Proteinase K混勻，即可繼續進行下一步。

b. 提取細胞基因組時，隻需加入Proteinase K混勻，即可繼續進行下一步。

c. 提取組織基因組時，加入Proteinase K混勻後，在56℃放置，直至組織溶解，簡短離心以去除管蓋內(nei) 壁的水珠，再進行下一步驟。

注意：不同組織裂解時間不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過夜）。不會影響 後續操作。每小時顛倒混合樣品2-3次，用水浴振蕩器也可

• 加入結合液CB並充分混勻後，置於70℃水浴10 min，等溶液變清亮，12,000rpm短離心以去 除管蓋內壁的水珠。

注意：加入緩衝(chong) 液GB時可能會(hui) 產(chan) 生白色沉澱，一般70℃放置時會(hui) 消失，不會(hui) 影響後續實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不*，可能導致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。當血液體(ti) 積≤200μl且沒有采用紅細胞裂解處理，或是樣本儲(chu) 存條件不佳，水浴後顏 色可能為(wei) 深褐色，注意溶液中沒有團塊等沉澱

• 加入220µl的無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現絮狀沉澱，簡短離心以去 除管蓋內壁的水珠。
• 將上一步所得溶液和絮狀沉澱都加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中），

12,000rpm 離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱AC放回收集管中。

• 加入500µl抑製物去除劑IR，12,000rpm離心1 min。倒掉收集管中的濾液。並將離心柱放回收集管中。
• 加入500µl 漂洗液WB，12,000rpm離心30 sec。（使用前請檢查是否已經加入無水乙醇）倒掉收集管中的濾液。並將離心柱放回

收集管中。

10. 重複步驟9的操作。

11. 將吸附柱AC柱放回收集管中，12,000rpm離心2 min，倒掉廢液。將AC吸附置於(yu) 室溫放置數分鍾，以*晾幹吸附材料中殘

餘(yu) 的漂洗液。