EASYspin組織/細胞RNA快速提取試劑盒

EASYspin RNA Rapid Tissue and cell Kit

 保存條件：本試劑盒在室溫儲(chu) 存 12 個(ge) 月不影響使用效果。

產(chan) 品介紹：

*的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解細胞和滅活細胞 RNA 酶，然後用乙醇調節

結合條件後,RNA 在高離序鹽狀態下選擇性吸附於(yu) 離心柱內(nei) 矽基質膜， 再通過

一係列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物，蛋白等雜

質去除，後低鹽的 RNase free H₂0 將純淨 RNA 從(cong) 矽基質膜上洗脫。

自備試劑：乙醇, β-巰基乙醇

注意事項：

1.需要自備一次性注射器，研缽。RA105 EASYspin  組織 細胞RNA快速提取試劑

盒-MBI2.裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手

套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生

理鹽水衝(chong) 洗。

3.關(guan) 於(yu) DNA 的微量殘留：

一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法*避免DNA 的微量殘留,

本公司的EASYspin 係列RNA 提取產(chan) 品，在大多數 RT-PCR 擴增過程中極其

微量的DNA 殘留（一般電泳 EB 染色紫外燈下觀察不可見）影響不是很大,

如果要進行嚴(yan) 格的mRNA 表達量分析如熒光定量 PCR,我們(men) 建議在進行模板

和引物的選擇時：

•  
• 選用跨內含子的引物,以穿過 mRNA 中的連接區,這樣 DNA 就不能作
•  
• 為模板參與擴增反應。
•  
• 選擇基因組DNA 和 cDNA 上擴增的產物大小不一樣的
•  
• 引物對。
•  
• 操作步驟：

提示：

ð 第--次使用前請先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入指+*定量無水乙醇!

ð 操作前在裂解液RLT 中加入β-巰基乙醇至終濃度 1%，如 1 ml RLT  中加入

10μl β-巰基乙醇。此裂解液+*好現用現配。配好的 RLT 4℃可放置一個(ge) 月

1.組織培養(yang) 細胞

a. 收集<107 懸浮細胞到一個(ge) 1.5ml 離心管，對於(yu) 貼壁細胞，孔板培養(yang) 可以直接

裂解， 細胞瓶培養(yang) 應該先用胰蛋白酶消化後吹打下來收集。

b. 2,000rpm 離心 10 sec（或者 300g 離心 5 min），使細胞沉澱下來。*吸棄

上清，留下細胞團，注意不*棄上清會(hui) 稀釋裂解液導致產(chan) 量純度降低。

c. 輕彈管壁將細胞沉澱*鬆散重懸， 加入 350μl（<5x106 細胞） 或者

600μl（5x106-1x107  細胞）裂解液RLT，吹打混勻後用手劇烈振蕩 20 sec，充分裂解。

d.用帶鈍針頭的一次性 1ml(配 0.9mm 針頭) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到

得到滿意勻漿結果(或者電動勻漿 30 sec),可以剪切 DNA,降低粘稠度和提高產(chan)

量。

e.接操作步驟項下 3。

2. 動物組織（例如鼠肝腦）

a. 電動勻漿：新鮮組織用解剖刀迅速切成小碎塊, 加入 350μl(<20mg 組織) 或

者600μl(20-30mg 組織)的裂解液RLT 後電動*勻漿 20-40 sec。

b. 液氮研磨+勻漿：在液氮中研磨組織成細粉後，取適量組織細粉

(20mg/30mg)轉入 裝有 350μl/600μl 組織裂解液 RLT 的 1.5ml 離心管中,  用手劇

烈振蕩 20 sec，充分裂解。用帶鈍針頭的一次性 1 ml(配 0.9mm 針頭)  注射器

抽打裂解物 10  次或直到得到滿意勻漿結果(或者電動勻漿30 sec),可以剪切

DNA,降低粘稠度和提高產(chan) 量。

c. 將勻漿後裂解物 12,000rpm 離心 3 min,沉澱可能存在的裂解困難的碎片或者不

溶物,將裂解物上清小心轉到一個(ge) 新離心管。