人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷(shang) 細胞(NK-92)

細胞介紹

NK-92是從(cong) 一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。NK-92細胞(經過照射以防止增殖)可以有效地用於(yu) 血液中白血病的體(ti) 外免疫清掃而不危及血細胞的功能。NK-92細胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表麵標記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表麵標記陰性。

細胞特性

1） 來源：惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷(shang) 細胞

2） 形態：淋巴母細胞

3） 含量：>1x10⁶ 個(ge) /mL

4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5） 規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優(you) 質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞後，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min後，於(yu) 潔淨操作台棄去上清，加入推薦使用的培養(yang) 基後轉移至10cm培養(yang) 皿或者T75培養(yang) 瓶中培養(yang) ，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞培養(yang) 步驟

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640培養(yang) 基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091)，75%；添加0.2mM肌醇，0.1mM β-Me，0.02mM葉酸，100U IL-2，馬血清12.5%，優(you) 質胎牛血清，12.5%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yang) 基，10%DMSO，現用現配。液氮儲(chu) 存。

二． 細胞處理：

1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 懸浮細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yang) 基後，將剩餘(yu) 細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鍾，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yang) 基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO後進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

2. 所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。

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