Version06062012

SPRabbitHRPKit(DAB)

兔Streptavidin-HRP試劑盒(帶DAB顯色液)



Cat.No.K2035

保存：2-8℃

組分說明

Cat.No.                                                                                   K2035                           K2035A

KitSize                                                                                       3ml                             18ml

內(nei) 源性過氧化物酶封閉液（試劑1，白色液體(ti) ）                   3ml                            18ml

封閉用正常羊血清工作液（試劑2，白色液體(ti) ）                   3ml                            18ml

生物素標記羊抗兔二抗工作液（試劑3，黃色液體(ti) ）              3ml                           18ml

HRP標記的鏈黴親(qin) 和素（試劑4，紅色液體(ti) ）                          3ml                           18ml 

DAB-A液（20×）                                                                       250μl                      1ml

DAB-B液（1×）                                                                       5ml                            20ml



*本試劑盒僅(jin) 適用於(yu) 一抗為(wei) 兔源抗體(ti) 的IHC實驗





產(chan) 品簡介

本試劑盒根據生物素(Biotin)與(yu) 鏈黴親(qin) 和素(Streptavidin)具有很強親(qin) 和力的原理設計。在兔源的一抗與(yu) 相應的靶抗原

結合後，本試劑盒中的生物素化羊抗兔二抗與(yu) 一抗特異結合；二抗上標記的生物素與(yu) 標記了過氧化物酶（HRP）的鏈黴親(qin) 和

素結合，形成抗原～特異性一抗～生物素化的二抗～HRP標記的鏈黴親(qin) 和素複合物。HRP可以催化底物顯色，從(cong) 而推斷待

檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用優(you) 化的標記和純化技術，使得其染色有更高靈敏度

和更低的背景，適合於(yu) 檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織切片，以及冰凍切片、細胞爬片、新鮮製備的血塗片等。兔Strept-

avidin-HRP試劑盒適合與(yu) 上海研謹生物即用型或濃縮型抗體(ti) 配套使用。

注意事項

1.以每張切片加入1滴（約50μl）計算，3ml可做60張切片，18ml可做360張切片。

2.對於(yu) 內(nei) 源性生物素含量比較豐(feng) 富的組織，使用本試劑盒時最好用內(nei) 源性生物素阻斷劑進行封閉。

3.DAB工作液現配現用，配製好的工作液2-8°C避光1小時內(nei) 有效。

4.實驗過程中避免組織片幹燥，因此各步孵育時工作液用量必需充足，保證*覆蓋組織樣本，且盡量在濕盒中進行孵育。

5.為(wei) 獲得最佳實驗結果，請務必優(you) 化實驗條件及試劑用量。

6.DAB為(wei) 可疑致癌物，使用時請采取必要的防護措施。

7.本產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研，不能用於(yu) 人體(ti) 反應或人體(ti) 治療。

    `使用方法

1.

常規處理欲檢測的石蠟或冰凍組織切片或細胞爬片等樣本。

1）組織切片或細胞爬片染色前處理：

a.石蠟切片

脫蠟水化：60ºC烤片1小時，二甲苯脫蠟二次，每次5分鍾；再依次浸入梯度乙醇（無水乙醇－無水乙醇－95%

－85%－75%乙醇）和蒸餾水中各5分鍾水化。

b.冰凍切片和細胞爬片

切片（或爬片）浸於(yu) 0.01MpH7.4PBS洗滌3次×5分鍾。然後用0.1%TritonX-100覆蓋組織（或細胞）浸潤

15分鍾，0.01MpH7.4PBS洗滌2次×5分鍾。

2）石蠟切片的抗原修複：絕大大多數情況下，石蠟組織切片用檸檬酸緩衝(chong) 液高壓修複都是適合的。

修複工作液配製：1L去離子水中加入10ml檸檬酸緩衝(chong) 液（IHC抗原修複液,100×)（Cat#：YJ0128），混勻即可。

修複過程：修複液加入高壓鍋內(nei) ，待修複切片浸於(yu) 修複液中（必需沒過組織），蓋上壓力鍋蓋，加熱至均勻噴汽，

從(cong) 噴汽開始計時，1~2分鍾後壓力鍋離開熱源，自然冷卻至室溫，取出切片，蒸餾水淋洗後，再用PBS

（0.01MpH7.4）漂洗2次，每次3分鍾。

2.滴加適量試劑1（內(nei) 源性過氧化物酶封閉液），室溫孵育10分鍾，PBS充分淋洗。

3.滴加適量試劑2（封閉用正常羊血清工作液），室溫孵育10分鍾，甩幹。

4.滴加適量一抗工作液（商品化即用型抗體(ti) 或適當比例稀釋的濃縮抗體(ti) ），按實驗要求孵育，然後PBS充分淋洗。

5.滴加適量試劑3（生物素標記羊抗兔二抗工作液），室溫孵育10分鍾，PBS充分淋洗。

6.滴加適量試劑4（HRP標記的鏈黴親(qin) 和素），室溫孵育10分鍾，PBS充分淋洗。

7.DAB顯色工作液配製：根據需要量，將試劑A和試劑B以1：19的體(ti) 積比混勻後即為(wei) DAB顯色工作液。也可選擇每

毫升試劑B中滴加1滴（約50μl）試劑A，混勻即可。

8.顯色：加適量的DAB顯色工作液於(yu) 需要顯色的組織切片或細胞爬片上即可顯色，顯色時間一般為(wei) 1~5分鍾。顯微鏡下

觀察控製顯色時間，當達到最佳顯色效果後，自來水衝(chong) 洗終止顯色。顯色後的切片經複染、脫水透明，封片後可長期保

存。

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