禽流g病毒H7N9亞(ya) 型三重熒光PCR檢測試劑盒

 本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，是針對甲型流感病毒、禽流g病毒H7和禽流gN9的檢測體(ti) 係，用於(yu) 血液、糞便、鼻拭子和咽拭子等樣本的檢測。

【產(chan) 品名稱】

通用名稱：甲型流感/禽流gH7N9亞(ya) 型三重熒光PCR檢測試劑盒

【試劑盒組成】

注：不同批號的試劑組份不可混用。

【儲(chu) 存條件及有效期】

本試劑盒貯存於(yu) -20℃的條件下有效期為(wei) 6個(ge) 月。

 【生產(chan) 日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

【適用儀(yi) 器(熒光PCR檢測儀(yi) )】

Ø   ABI公司Prism7000、7300、7500係列

Ø   RotorGene係列

Ø   Bio-Rad公司的iCycler係列

Ø   Roche LightCycler係列

【自備試劑】

核酸提取試劑。

【樣本采集、存放及運輸】

1．樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集。

2．存放：樣本在2℃—8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反複凍融（最多凍融3次）。

3．運輸：采用冰h或泡沫箱加冰密封進行運輸。

【檢驗方法】

1．樣本處理：

用戶可采用病毒RNA提取試劑盒提取RNA用於(yu) 檢測。說明：陽性對照及陰性對照無需提取，直接上樣。

2．擴增試劑準備（PCR前準備區）：

從(cong) 試劑盒中取出三重RT-PCR 反應液、Taq酶及PCR Enhancer，室溫融化並振蕩混勻後，2000rpm離心10秒。設所需要的PCR反應管管數為(wei) n（n = 樣本數 + 1管陰性對照 + 1管陽性對照），每個(ge) 測試反應體(ti) 係配製如下表：

計算好各試劑的使用量，加入一適當體(ti) 積離心管中，充分混合均勻，2000rpm離心10秒，向設定的n個(ge) PCR反應管中分別加入20 µl，轉移至樣本處理區。

3．加樣（樣本處理區）：

向所設定的n個(ge) PCR 反應管中分別加入待檢樣本RNA、陰性對照和陽性對照各5µl，蓋緊管蓋，轉移至檢測區。將PCR反應管排好放入PCR儀(yi) 內(nei) ，記錄樣本擺放順序。

4．PCR擴增（檢測區）

4.1       循環條件設置

50℃：10 min；

95℃：3 min；

95℃：10 sec, 60℃: 1 minc, 40個(ge) 循環。

熒光信號收集設在60℃。反應體(ti) 係設為(wei) 25ul。

4.2       儀(yi) 器檢測通道選擇

甲型流感待測熒光為(wei) FAM熒光素，H7型待測熒光為(wei) VIC熒光素，N9型待測熒光為(wei) ROX熒光素。

5. 結果分析條件設定：

5.1       閾值(threshold)設定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照曲線（無規則的噪音線）的最高點為(wei) 準。

5.2       基線（baseline）應選擇該次實驗指數擴增前所有樣本熒光信號比較穩定的一段區域（所有樣本熒光信號無較大波動），起始點（循環數）應避開熒光采集起始階段的信號波動，終止點（循環數）應比最早出現指數擴增的樣本Ct值減少1-2個(ge) 循環。

注：具體(ti) 設置方法請參照各儀(yi) 器使用說明書(shu) 。

6. 質控標準：

陰性對照的檢測結果應為(wei) 陰性；

陽性對照的Ct值應小於(yu) 等於(yu) 32.0。

否則，此次實驗視為(wei) 無效。7. 結果判斷：

Ø Ct值無讀數的樣本為(wei) 陰性。

Ø Ct值≤38.0的樣本為(wei) 陽性。

Ø Ct值大於(yu) 38.0的樣本建議重做。重做結果Ct值＜40.0為(wei) 陽性，否則為(wei) 陰性。

【試劑盒使用注意事項】

1. 有關(guan) 實驗室管理規範請嚴(yan) 格按照行業(ye) 行政主管部門頒布的有關(guan) 基因擴增檢驗實驗室的管理規範執行。

2. 本試劑盒僅(jin) 用於(yu) 體(ti) 外檢測。

3. 實驗請嚴(yan) 格分區操作：

第一區：PCR前準備區——準備擴增所需試劑；

第二區：樣本處理區——待測樣本和對照品處理；

第三區：檢測區——PCR擴增檢測。

4. 各區物品均為(wei) 專(zhuan) 用，不得交叉使用，避免汙染，實驗後即請清潔工作台。

5. 試劑盒內(nei) 各試劑使用前，充分融化後請稍事離心。

6. 在－20℃保存的樣本裂解產(chan) 物，應在加樣前置室溫解凍，作短暫離心後使用。

7. 分裝有反應液的反應管應扣蓋或裝入密實袋內(nei) 再轉移至樣本區。

8. 加樣時應使樣品*落入反應液中，不應有樣品粘附於(yu) 管壁上，加樣後應盡快蓋緊管蓋。

9. 擴增完畢立即取出反應管，密封在專(zhuan) 用塑料袋內(nei) ，丟(diu) 棄於(yu) 指d地點。

10. 反應液分裝時應盡量避免產(chan) 生氣泡，上機前注意檢查各反應管是否蓋緊，以免熒光物質泄露汙染儀(yi) 器。

11. 實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次氯酸鈉的廢物缸內(nei) ，並與(yu) 其他廢棄物品一同滅菌後丟(diu) 棄。

12. 工作台及各物品定期用1%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈進行消毒。

從(cong) 2011年開始我們(men) 致力於(yu) 在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作夥(huo) 伴!

如果您受時間、試驗條件等限製而無法完成您的課題研究，歡迎您與(yu) 我們(men) 聯係。

18luck赞助服務：