2×GC-rich PCR  MasterMix（無染料）說明書(shu)

貨號：K0658

保存條件：-20℃長期保存。如需頻繁使用，可存放於(yu) 2-8℃，盡量避免反複凍融。

組分說明

              Cat. No.                                  K0658

              Kit Size                                    1 ml

              2×GC-rich PCR MasterMix（無染料）          1 ml

              RNase-Free Water                            1 ml

              注意：2×GC-rich PCR MasterMix含有Es Taq DNA Polymerase,

              2×Es Taq PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400  µM dNTP mix。

產(chan) 品簡介

　　本品是由Es Taq  DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg、dNTPs以及PCR穩定劑

和增強劑組成的預混體(ti) 係，濃度為(wei) 2×。預配好的PCR混合液使操作更加2+ 簡單快捷，可最大限度地減少人為(wei) 誤差和汙染。經過優(you) 化的緩衝(chong) 液配方使酶的作用發揮最大功效，實現對複雜模板的高保真、高效率擴增，d創的MasterMix配方使整個(ge) 反應體(ti) 係非常穩定，重複性好。本品不含染料， PCR程序結束後可根據需要加入適量上樣緩衝(chong) 液後進行電泳操作。擴增得到的PCR產(chan) 物3′端附有一個(ge) “A"堿基，因此可直接用於(yu) T/A克隆。主要適用於(yu) 對保真性要求較高的PCR反應和結構複雜的模板如GC含量高，有二級結構等的擴增，對簡單模板有效擴增的片段可達20 kb，對複雜模板可達10 kb。

質量控製

　　經檢驗無外源核酸酶活性； PCR方法檢測無宿主殘餘(yu) DNA；能有效地擴增多種基

因組中的單拷貝基因；2-8℃存放三個(ge) 月，活性無明顯改變。

                本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途

    使用方法

    以下舉(ju) 例為(wei) 常規PCR反應體(ti) 係和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的

    片段大小不同進行相應的改進和優(you) 化。

    1. PCR反應體(ti) 係

試劑                          50 μl反應體(ti) 係        終濃度

2×GC-rich PCR MasterMix         25 μl                1×

Forward Primer，10 µM            2 μl               0.4 μM

Reverse Primer，10 µM            2 μl                        0.4 μM

Template DNA                    2  μl              <1 μg/reaction

RNase-Free Water               up to 50 μl

       注意：引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為(wei) 設定範圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(you) 化反應體(ti) 係。

2. PCR反應條件

步驟                 溫度              時間

預變性               94℃             2 min

變性                 94℃             30 s

退火                55-65℃           30 s     25-35個(ge) 循環

延伸                 72℃             30 s

終延伸               72℃             2 min

       注意：1）一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優(you) 化反應條件。

       2）延伸時間應根據所擴增片段大小設定，Es Taq DNA Polymerase的擴增效率為(wei) 1 kb/30 s。

       3）可根據擴增產(chan) 物的下遊應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會(hui) 增加，非特異性背景嚴(yan) 重。所以在保證產(chan) 物得率的前提下應盡量減少循環次數。

    3.結果檢測：本產(chan) 品不含染料，反應結束後取5  µl反應產(chan) 物加入適量上樣緩衝(chong) 液後進行電泳檢測結果。

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