Taq DNA Polymerase說明書(shu)

貨號：K0680

保存條件：-20℃保存。

組分說明

         Cat. No.                       K0680     K0680E      K0680F

         Kit Size                        500 U      6×500 U     5×2000 U

         Taq DNA Polymerase,  5 U/μl     100 μl     6×100 μl    5×400 μl

         10×Taq PCR Buffer with  Mg2+    2×1 ml      3×5 ml      8×5 ml

                 注意：本產(chan) 品的10×Taq PCR Buffer中含有15 mM鎂離子。

產(chan) 品簡介

　　Taq DNA  Polymerase是通過大腸杆菌表達純化的重組酶。其基因來源於(yu) Thermus

aquaticus polymerase。該蛋白分子量為(wei) 94 kDa，具有5′→3′ DNA聚合酶活性和5′→3′外切核酸酶活性，無3′→5′外切核酸酶活性，擴增得到的PCR產(chan) 物3′端附有一個(ge) “A"堿基，因此可直接用於(yu) T/A克隆。本產(chan) 品具有延伸速度快、擴增效率高的特點，主要適用於(yu) PCR法擴增DNA片段、DNA序列測定等實驗。

活性定義(yi)

　　用活性化的大馬哈魚精子DNA作為(wei) 模板/引物，在74℃，30分鍾內(nei) ，將10 nmol脫氧

核苷酸摻入到酸性不溶物質所需的酶量定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 活性單位（U）。

質量控製

　經過多次柱純化， SDS-PAGE檢測其純度大於(yu) 99%；經檢測無外源核酸酶活性；

PCR方法檢測無宿主殘餘(yu) DNA；能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因；室溫存放一

個(ge) 月，無明顯活性改變。

                本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途

     使用方法

     以下舉(ju) 例為(wei) 常規PCR反應體(ti) 係和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的

     片段大小不同進行相應的改進和優(you) 化。

     1. PCR反應體(ti) 係

 試劑                       50 μl體(ti) 係              終濃度

10×Taq PCR Buffer with Mg²⁺          5 μl             1×

dNTP Mix，2.5 mM each                    4 μl        200 μM each

Forward Primer，10 μM                    2 μl           0.4 μM

Reverse Primer，10 μM                    2 μl           0.4 μM

Template DNA                           <1 μg       <1 μg/reaction

Taq DNA Polymerase，5 U/μl              0.25 μl

RNase-Free Water                     up to 50 μl

        注意：1）引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為(wei) 設定範圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(you) 化反應體(ti) 係。

        2）鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為(wei) 設定範圍的參考。本產(chan) 品的10×PCR Buffer中已經含有15 mM鎂離子，可根據不同的引物對和模板來調節鎂離子濃度，由此優(you) 化反應體(ti) 係。

2. PCR反應條件

步驟                    溫度                 時間

預變性                    94℃                2 min

變性                    94℃                30 s

退火                 55-65℃               30 s       25-35個(ge) 循環

延伸                    72℃                30 s

終延伸                    72℃                2 min

注意：1）一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優(you) 化反應條件。

2）延伸時間應根據所擴增片段大小設定，本產(chan) 品Taq DNA Polymerase的擴增效率為(wei) 1 kb/30 s。

3）可根據擴增產(chan) 物的下遊應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會(hui) 增加，非特異性背景嚴(yan) 重。所以在保證產(chan) 物得率的前提下應盡量減少循環次數。

3.結果檢測：反應結束後取5  µl反應產(chan) 物，加入適量上樣緩衝(chong) 液後，進行瓊脂糖凝膠電

       泳檢測。

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