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HCT-15/5FU 人結直腸癌氟尿嘧啶耐藥株
點擊次數：712 更新時間：2023-07-20

HCT-15/5FU 人結直腸癌氟尿嘧啶耐藥株

Fluorouracil resistant strains of human colorectal cancer ,HCT15/5FU

貨號：YJ-h073（STR（HCT15）鑒定）

價(jia) 格： 2500.0

規格： 1*10 6


細胞介紹

HCT-15/FU為(wei) 由HCT-15細胞構建的耐5-FU藥物細胞株。

細胞特性

1）來源：人結腸癌細胞耐藥篩選

2）形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3）含量：>1×10^6  細胞數

4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅(jin) 供科研使用。


細胞運輸、保存及注意事項


複蘇細胞

凍存細胞

包裝

充液的T25細胞培養(yang) 瓶

1mL凍存管

運輸條件

常溫

幹冰

保存方式

37℃恒溫細胞培養(yang) 箱

-80℃冰箱中保存過夜後轉入液氮

或立即複蘇

※注意事項

1. 收到細胞後，若發現培養(yang) 瓶破損、漏液及細胞有汙染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請立即拍照並聯係我們(men) 。照片包括細胞培養(yang) 瓶/凍存管外觀，顯微鏡下細胞照片（100倍，200倍各2張）；

2. 若收到的複蘇細胞有少量細胞脫落、飄起，可能由於(yu) 運輸途中導致。請先於(yu) 37℃恒溫細胞培養(yang) 箱中靜置2~3h後，再進行處理；

3. 複蘇細胞的充液培養(yang) 基為(wei) 不含藥物的維持培養(yang) 基，血清濃度較低，收到細胞後請及時更換為(wei) 完全培養(yang) 基；

4. 建議收到細胞後，首先進行擴增（至少3代），並凍存部分細胞以備用。

5. 初次培養(yang) ，當細胞匯合度達約80%時，可加入10~16ug/mL 5-FU的完全培養(yang) 基培養(yang) 至細胞完全融合後傳(chuan) 代。細胞傳(chuan) 代1~2次後仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至20ug/mL繼續培養(yang) ；若此過程中細胞停止增殖，且狀態較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yang) 基培養(yang) ，至細胞匯合度達80%左右，且生長狀態較好時，再更換為(wei) 所需的5-FU藥物濃度。

6. 細胞凍存過程中，不可添加藥物，且凍存液中不含藥物。

細胞培養(yang) 試劑的配製

1）5-FU藥物的配製及保存

建議將5-FU藥物配製成20mg/mL的母液，即使用1mL 1M的NaOH溶液溶解20mg 5-FU藥物，使其完全溶解。（若所購買(mai) 的5-FU藥物規格為(wei) 10mg，則加入0.5mL 1M的NaOH溶液，待其完全溶解即為(wei) 20mg/mL母液）

注意：可根據用量配置藥物，並將藥物分裝保存，避免反複凍融導致藥物失效。溶解後的5-FU，4℃保存1周，-20℃保存1個(ge) 月，-80℃保存6個(ge) 月。

2）凍存液的配製

90%優(you) 質胎牛血清+10%DMSO，現用現配。（凍存液中不含藥物）

3）完全培養(yang) 基的配製（推薦使用YJ-h073-001b）

成分

體(ti) 積/濃度

優(you) 質胎牛血清

10%

雙抗

1%

20ug/mL 5-FU

0.1%母液（20mg/mL）

RPMI-1640培養(yang) 基

補充至所需體(ti) 積

細胞培養(yang) 條件

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%~80%。

細胞處理

1）凍存細胞的複蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yang) 基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yang) 基重懸細胞後，均勻鋪於(yu) 含6~8mL完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中，置於(yu) 37℃恒溫細胞培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

注意：①細胞複蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yang) 基。須在細胞生長至匯合度達80%左右時，方可添加10~16ug/mL 5-FU藥物；若細胞生長狀態較為(wei) 緩慢，可適當降低5-FU的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含5-FU的完全培養(yang) 基培養(yang) 至細胞生長狀態較好時，再更換為(wei) 所需的5-FU濃度。

②建議複蘇細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護麵罩，避免凍存管處於(yu) 溫差較大情況下發生爆炸，造成人員傷(shang) 害。

2）細胞傳(chuan) 代（建議以同等底麵積的培養(yang) 瓶/皿按照1：2比例傳(chuan) 代）

①待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

②棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸淨殘餘(yu) 的PBS。

③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓並脫落，即可輕拍培養(yang) 瓶至細胞全部脫落。迅速拿回操作台，加入2倍體(ti) 積的、含10%FBS的培養(yang) 基中止消化。

④將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。

⑤向細胞沉澱中加入1~2mL完全培養(yang) 基重懸細胞，輕吹混勻。將細胞懸液按1：1的比例均勻鋪於(yu) 2個(ge) 新的培養(yang) 瓶/皿中，添加6~8mL完全培養(yang) 基。

注意：細胞傳(chuan) 代1~2次後仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至20ug/mL繼續培養(yang) ；若此過程中細胞停止增殖，且狀態較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yang) 基培養(yang) ，至細胞匯合度約80%，且生長狀態較好時，再更換為(wei) 所需的5-FU藥物濃度。

3）細胞凍存

①細胞凍存時，步驟同2）細胞傳(chuan) 代的①~④，細胞計數後，加入配製好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×10^6 ~ 1×107個(ge) 細胞/mL分配到一個(ge) 凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

注意：細胞凍存過程中，不可添加藥物。

②將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。


注意事項

1.收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精後放在培養(yang) 箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，並對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體(ti) 外觀拍一張照片，觀察培養(yang) 基的顏色和是否有漏液情況，隨後在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有汙染情況。作為(wei) 我方進行銷售依據。

3.由於(yu) 細胞狀態受環境、操作和運輸等多方麵因素影響，故本公司隻保證客戶收到細胞後一周內(nei) 的細胞狀態，故客戶需要售後時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題後客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大於(yu) 7天。

4.所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。

5.客戶在細胞培養(yang) 過程中，有技術問題可以聯係谘詢技術售後，我們(men) 隨時給予解答。

從(cong) 2011年開始我們(men) 致力於(yu) 在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十餘(yu) 年，是客戶您值得信賴的科研合作夥(huo) 伴!

如果您受時間、試驗條件等限製而無法完成您的課題研究，歡迎您與(yu) 我們(men) 聯係。

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