豬乙型腦炎病毒抗體(ti) （IgG）診斷試劑盒（酶聯免疫法）

說明書(shu)

【產(chan) 品名稱】

通用名稱：豬乙型腦炎病毒抗體(ti) ( IgG )診斷試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab

【規格】

96 T×2/盒

【預期用途】

本試劑盒用於(yu) 定性測定豬血清中日本乙型腦炎病毒（又稱流行性乙型腦炎）IgG抗體(ti) 。用於(yu) 評估豬場豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況，感染豬的血清學診斷以及豬乙型腦炎病毒的流行病學調查。

【檢驗原理】

 本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗( ELISA )原理，由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為(wei) 包被抗原與(yu) 樣本中的JEV-IgG結合，再與(yu) 酶標抗豬IgG抗體(ti) 形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標抗豬IgG抗體(ti) "複合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與(yu) JEV-IgG的量成正比，當顯色超過設定的臨(lin) 界值時結果判為(wei) 陽性，表明免疫有效或有自然感染。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標儀(yi) （雙波長450/630 nm濾光片）

2．微量移液器（單道10-100 μl、0.5-10 μl、多道30-300 μl）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．一次性槍頭（10 μl，200 μl）

6．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為(wei) 豬血清，樣本應無菌采集，2 ℃－8 ℃貯存應不超過一周，長期應在-20 ℃以下保存。

2．避免使用嚴(yan) 重溶血、有沉澱物、含懸浮纖維蛋白及汙染長菌的血清樣本。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡: 試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30 min。酶標板應在室溫中平衡至潮氣幹盡後方可拆開。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋 （例：將5 μl樣本加至195 μl樣本稀釋液中）。

3．配製洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋10倍（例：將10 ml洗滌液加入90 ml去離子水中）。若10倍濃縮洗滌液出現結晶，屬正常現象，放置37 ℃至溶解後即可。

【操作步驟】

1. 加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100 μl於(yu) 相應孔中（可不設空白對照）。其餘(yu) 為(wei) 樣本孔，每孔加100 μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本。

2. 溫育：加樣後，蓋上蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。

3. 洗板：甩去孔內(nei) 液體(ti) ，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10 s，直接甩出，洗滌3次，最後一次洗滌後吸幹板內(nei) 液體(ti) 。

4. 加酶：每孔加酶標記物100 μl。

5. 溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。

6. 洗板：同步驟3。

7. 顯色：每孔加顯色劑100 μl，振蕩混勻，37 ℃避光反應10 min。

8. 終止：每孔加終止液50 μl，振蕩10 s，充分混勻，終止後即讀數。

9. 讀數：以450 nm/ 630 nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結果判定】

在酶標儀(yi) 上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.60，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.10；樣品中抗體(ti) 存在與(yu) 否，或樣本中抗體(ti) 的相對水平的高低由S/P值決(jue) 定，S/P值計算時按以下方式處理:

S/P=(樣本OD_450/630值－NCx—)/（PCx—－NCx—)，其中NCx—表示陰性對照孔平均OD_450/630值（若小於(yu) 0.05，則按照0.05計算），PCx—表示陽性對照孔平均OD_450/630值；

當樣本的S/P≥0.25時判為(wei) 陽性；樣品S/P值＜0.25時判為(wei) 陰性。

【注意事項】

1. 請在使用試劑盒之前，仔細閱讀說明書(shu) 。

2. 請不要使用過期的試劑盒組分，不要將不同批次的組分混合使用。

3. 本試劑盒應按含有傳(chuan) 染性材料對待，試驗廢棄物應經121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min，或用5.0 g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30 min後廢棄。

4. 未用完的微孔板須放回有幹燥劑的鋁箔袋並密封2 ℃-8 ℃保存。未用完的液體(ti) 試劑應蓋好瓶蓋，與(yu) 其它配套組份放入試劑盒中於(yu) 2 ℃-8 ℃避光保存。

5. 應用微量移液器加入樣本及試劑，並經常校對其準確性。

6. 加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有遊離酶不能洗淨或各孔間的交叉汙染。

7. 終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水衝(chong) 洗幹淨。

【儲(chu) 存條件及有效期】

於(yu) 2 ℃－8 ℃避光保存，防止冷凍，有效期12個(ge) 月。

【生產(chan) 日期及批號】 

詳見包裝袋和外包裝盒。

僅(jin) 供獸(shou) 醫診斷使用

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