ELISA中陰性本底的形成原因和消除方法

在酶聯固相免疫實驗中，尤其在間接ELISA法中，經常會(hui) 碰到陰性本底的問題。主要是本底過高和不同標本的本底值差異較大。本底或稱背景，是ELISA中的非特異性顯色。底物未經過酶作用而呈現的顏色稱為(wei) 空白。底物液如配製不當會(hui) 出現一定的空白值。這個(ge) 空白值隻要不太高（A＜0.05），可從(cong) 各測定值中減除，並不影響實驗結果。這裏討論的是不含待測抗原或抗體(ti) 的陰性標本在ELISA中出現的本底。從(cong) 理論上來說，隻有陰性標本zui終才能引起顯色反應，那麽(me) ，為(wei) 什麽(me) 會(hui) 出現本底呢？

  固相載體(ti) 的吸附：在酶免疫測定中，ELISA的特點是利用分離遊離和結合的酶結合物的手段。固相載體(ti) 與(yu) 吸附在其上的抗原或抗體(ti) 形成固相抗原或固相抗體(ti) ，即免疫吸附劑（Immu-nosorbent）。通常所用的固相載體(ti) 聚苯乙烯其表麵主要是疏水基團，通過疏水鍵與(yu) 蛋白質結合。這種物理性吸附是非特異性的，雖然蛋白質的分子量、等電點、濃度等對吸附的量有一定的影響，但總的來說各種蛋白質均能吸附在聚苯乙烯載體(ti) 的表麵。因此除在包被時有目的地使抗原或抗體(ti) 吸附在載體(ti) 上外，在ELISA各個(ge) 步驟中均有可能發生幹擾物質的吸附，使zui終產(chan) 生與(yu) 受檢抗原－抗體(ti) 反應無關(guan) 的顯色，這是形成本底的主要原因。

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