夾心法測抗原方法和包被條件

在夾心ELISA法中可用棋盤滴定法同時選擇包被抗體(ti) 和酶標抗體(ti) 的工作濃度， 1：抗體(ti) 免疫球蛋白用包被緩衝(chong) 液稀釋至蛋白濃度為(wei) 10UG/ML"0.1UG/ML,FB分別在ELISABAN板上進行包被，每一濃度包被三個(ge) 縱行，洗。

2在一個(ge) 橫行各包被孔中加入強陽性抗原液，另一橫行加入弱陽性抗原液，第三橫行加入陰性對照液，腐育，洗條。

3將酶標抗體(ti) 用稀釋液稀釋成三個(ge) 濃度

分別加入每一包被濃度的一個(ge) 縱行中，孵育，洗滌。

4加底物顯色，加酸終止反應後，讀取A值。

5以強陽性抗原液的A值在0.8左右，陰性參考液的A值小於(yu) 0.1的條件作為(wei) zui適條件，據此選擇包被抗體(ti) 和酶標抗體(ti) 的工作濃度。包被緩衝(chong) 液的PH和離子強度對吸附也有影響。包被蛋白質的緩衝(chong) 溶液的PH宜片5堿性，在PH=7~10都可以達到較好的吸附效果，如常用的緩衝(chong) 溶液有碳酸鹽緩衝(chong) 溶液（PH=9.6）·                           

 緩衝(chong) 液還影響某些方法的敏感性，在用類脂和病毒抗原包被時，有必要加入脫氧膽酸鈉，將包被的抗體(ti) F 段部分變性可以增加敏感性。

有些單克隆抗體(ti) 很難吸附固相，需要試用不同的緩衝(chong) 液及緩衝(chong) 液的濃度與(yu) PH，另外，還要注意包被的條件和包被抗原與(yu) 抗體(ti) 的濃度。