ELISA原理酶聯免疫吸附測定

1.ELISA原理和類型

抗體(ti) 或抗原可以吸附在合適的載體(ti) 上，酶標記抗體(ti) 或抗原相應的抗原或抗體(ti) 形成酶標記的抗原抗體(ti) 免疫複合物，在一定的底物參與(yu) 下，複合物上的酶催化底物使其水解，氧化或還原成為(wei) 另一種帶色物質。由於(yu) 在一定的條件下，酶的降解底物和呈現色澤是成正比的，因此可以應用分光光度計進行測定，從(cong) 而計算出參與(yu) 反應的抗原和抗體(ti) 的含量。這就是Peter Perlmann 和Eva Engvall所建立的ELISA技術的原理。

按照所用固相載體(ti) 的不同，ELISA又分為(wei) 普通ELISA和Dot-ELISA.

招照抗體(ti) 或抗原在固相載體(ti) 上不同的吸附方法，又根據使用不同的抗體(ti) 例如能與(yu) 抗原直接反應的抗體(ti) （通常稱為(wei) 一抗），能與(yu) 一抗起免疫結合反應的標有酶的抗體(ti) （通常稱為(wei) 酶標二抗），ELISA分化出多項不同的測定方法。

ELISA一般分為(wei) 下述幾種類型：

• 直接法：首先將抗原吸附於載體表麵，然後將酶標記抗體與該抗原反應結合，形成酶標記的免疫複合物，zui後加入底物產生有色物質，進行光密度測定，算出抗原存在量。
• 間接法：首先將抗原吸附於載體表麵，然後加抗血清，使特異性抗體（*抗體）與抗原結合，再加酶標記抗球蛋白（第二抗體，即抗*抗體的抗體），與*抗體結合，形成酶標記的免疫複合物，zui後加入底物產生有色物質，進行光密度測定，算出抗體存在量。
• 雙重抗體法：首先將抗體吸附於載體表麵，形成抗體球蛋白致敏載體表麵，然後加抗原溶液，使抗原與抗體結合，再加入酶標記的抗體球蛋白，與被致敏載體表麵吸附的抗原結合，形成酶標記的免疫複合物，zui後加入底物產生有色物質，進行光密度測定，算出抗原存在量。ELISA雙重抗體法也稱ELISA雙重抗體夾心法，該法能減弱非特異顏色的幹擾，並且在測定時可不做空白對照。
• 酶標記抗原競爭法：首先將抗體吸附於載體表麵，形成抗體球蛋白的致敏載體表麵，然後加入以不同比例混合的抗原和酶標記的抗原溶液，與吸附在載體上的抗體發生免疫反應，形成酶標記抗原與抗體的免疫複合物和非標記抗原與抗體的免疫複合物，zui後加入底物，通過酶的底物水解量(測定光密度而知)來確定未知溶液有無抗原及抗原量多少。

酶標記抗原競爭(zheng) 法利用混合的未標記抗原和酶標記抗原相互競爭(zheng) 抗體(ti) 上的結合點，從(cong) 而進行抗原的定量。未標記抗原的量越大，則酶標記抗原和抗體(ti) 的結合就越受到抑製。但是競爭(zheng) 法在實驗時比較複雜，有時在抗原混合液與(yu) 相應抗體(ti) 孵育後，在測定遊離抗原與(yu) 抗體(ti) 相結合抗原的活性以前，要先進行鹽析或有機溶劑沉澱或第二抗體(ti) 沉澱等方法把兩(liang) 種不同存在形態的抗原分開。並且在加入底物後，容易產(chan) 生血清色的物質。因此，每次測定時都需做空白對照。由於(yu) 這些缺點，酶標記抗原競爭(zheng) 法使用不多。

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