細胞培養(yang) 的汙染類型

汙染是細胞培養(yang) 的大敵。預防和避免汙染是細胞培養(yang) 成功的關(guan) 鍵之一。一開始就要十分重視，應積極采取措施，防止汙染，否則會(hui) 前功盡棄，不僅(jin) 浪費時間，而且浪費人力、物力，甚至造成無法彌補的損失。

　　*節汙染的類型

　　細胞培養(yang) 過程中的汙染不僅(jin) 僅(jin) 指微生物，而且還包括所有混入培養(yang) 環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質，包括生物和化學物質。

　　一、細菌汙染

　　細菌汙染是實驗室細胞培養(yang) 中常見的汙染，即使在細胞培養(yang) 液中加入了抗菌素（一般為(wei) 預防劑量），也可能因為(wei) 操作不慎而引起汙染。zui常見的有革蘭(lan) 氏陽性菌，如枯草杆菌以及大腸杆菌、假單胞菌等革蘭(lan) 氏陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見。

　　培養(yang) 細胞受細菌汙染後，會(hui) 出現培養(yang) 液變混濁，pH改變。也有的培養(yang) 液肉眼觀察無多少改變，隻能在鏡下發現菌體(ti) 才知汙染。所以，每天應仔細觀察。汙染後細胞發生病理改變，胞內(nei) 顆粒增多、增粗，zui後變圓脫落死亡，造成試驗失敗和細胞株（係）丟(diu) 失。

　　二、真菌汙染

　　真菌汙染是細胞培養(yang) 過程中zui常見的一種，尤其在黴雨季節進行細胞培養(yang) 更易汙染。zui常見的真菌有煙曲黴、黑曲菌、孔子黴、毛黴菌、白色念珠菌和酵母菌。

　　培養(yang) 細胞受真菌汙染後，可見培養(yang) 液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長，培養(yang) 液一般不發生混濁；倒置顯微鏡下可見絲(si) 狀、管狀或樹枝狀的菌絲(si) 縱橫交錯在細胞之間或培養(yang) 基中，有的呈鏈狀排列。念珠菌和酵母菌呈卵圓形散在細胞周邊和細胞之間。個(ge) 體(ti) 細小，有增多趨勢。鏡下看時，要將培養(yang) 瓶用酒精棉球擦幹淨，以防止與(yu) 瓶外尤其瓶底外麵生長的菌絲(si) 相混淆。真菌汙染後，細胞生長變慢，但zui後由於(yu) 營養(yang) 耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。

　　三、支原體(ti) 汙染

　　支原體(ti) 是介於(yu) 細菌與(yu) 病毒之間能獨立生活的zui小微生物，zui小直徑0.2μm，一般過濾除菌無法去除它，光鏡下難以看清它的形態結構。開始不易發現，能在偏堿條件（pH7.6～8.0）下生存，對青黴素有抗藥性。多吸附於(yu) 細胞表麵或散在於(yu) 細胞之間。電鏡下可見其有三層結構，無細胞壁，中央有電子密度大的密集顆粒或絲(si) 狀的中心囊。

　　培養(yang) 細胞受支原體(ti) 汙染後，部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢，部分細胞變圓，從(cong) 瓶壁脫落。但多數細胞汙染後無明顯變化，或略有變化，若不及時處理，還會(hui) 產(chan) 生交叉汙染。

　　四、病毒汙染

　　采用組織細胞培養(yang) 法生產(chan) 疫苗，如果沒有除去潛在病毒的組織培養(yang) 物，會(hui) 產(chan) 生病毒汙染。目前，從(cong) 原代猴腎細胞的培養(yang) 中已發現不少於(yu) 20種血清性病毒。盡管病毒汙染的細胞不影響原代培養(yang) ，但生產(chan) 疫苗是不安全的。若二倍體(ti) 細胞係有SV40或多發瘤病毒，B淋巴細胞含EB病毒，細胞和會(hui) 發生變異、轉化，形成異倍體(ti) 的細胞係。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chan) 和疫苗、幹擾素等生物製品製作中的難題。

　　五、非同種細胞汙染

　　由於(yu) 細胞培養(yang) 操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yan) 格分開，操作不當，往往會(hui) 使一種細胞被另一種細胞汙染。如“靈長類”細胞係發現猴和鼠類細胞的混合物，ERK/KD細胞是從(cong) 兔腎中分離出來的，而現在句卻認為(wei) 是HeLa細胞。目前，世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所汙染，致使許多實驗宣告無效。

　　非細胞培養(yang) 物所造成的化學成分的汙染也偶有發生，大多是由於(yu) 細胞培養(yang) 所需物品清洗消