*0感受態細胞實驗步驟                   

*0 Competent Cell
*0感受態細胞
目錄號：YJ0807

保存條件：-80℃保存。

組分說明

                   Cat. No.                         YJ0807B
                   Size                             10×100 μl
                   *0 Competent Cell             10×100 μl
                   Control DNA pUC19，0.1 ng/μl         10 μl

產(chan) 品簡介

　　本產(chan) 品是大腸杆菌*0菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用於(yu)   DNA的
熱擊轉化。*0是一種常用於(yu) 質粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因產(chan) 物可與(yu) 載體(ti)
編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用於(yu) 藍白斑篩選。使用pUC19質粒檢測，轉
化效率可達10 ⁸  ，適用於(yu) 的質粒DNA克隆並能保證高拷貝質粒的穩定複製。

本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途 

    注意事項

    1．感受態細胞一定要用幹冰運輸。感受態細胞應在  -80℃下保存，不可反複凍融和放
       置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。
    2．轉化所有步驟均在無菌條件下操作。
    3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

    1．取感受態細胞置於(yu) 冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為(wei) 50-100 μl，可以根據
       實際情況分裝使用。
       以下實驗以50 μl感受態細胞為(wei) 例。
    2．待感受態細胞融化後，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量
       的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕
       輕吹打混勻，冰浴30分鍾。
    3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鍾。
    4．每個(ge) 離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yang) 基（不含抗生素），混勻後置於(yu) 37℃
       搖床，150 rpm振蕩培養(yang) 45分鍾使菌體(ti) 複蘇。
    5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的   SOC或LB固體(ti)
       瓊脂培養(yang) 基上，用無菌的塗布棒將細胞均勻塗開，將平板置於(yu) 37℃直至液體(ti) 被吸收，
       倒置培養(yang) ，37℃培養(yang) 12-16小時。

       注意：1）塗布用量可根據具體(ti) 實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產(chan) 物塗布平板；若
       轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產(chan) 物塗布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心（4,000

       rpm，2分鍾）後吸除部分培養(yang) 液，懸浮菌體(ti) 後將其塗布於(yu) 平板中。

       2）新製備的固體(ti) 培養(yang) 基不易塗幹，可將平板正置於(yu) 37℃直至液體(ti) 被吸收後再倒置培養(yang) 。
       3）塗布剩餘(yu) 的菌液可置於(yu) 4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再塗布新培養(yang) 基進行培養(yang) 。

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