DNA轉染試劑說明書(shu)
DNAFect Transfection Reagent
目錄號:YJ0860
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組分說明
Catalogno. YJ0860 YJ0860A
KitSize 0.5 ml 1 ml
DNAFect Transfection Reagent 0.5 ml 1 ml
產(chan) 品簡介
DNAFect是一種的陽離子脂質體(ti) 轉染試劑,適用於(yu) 多種細胞的DNA轉染。對於(yu) 大多數細胞係包括原代細胞都有較高的轉染效率,並且對細胞毒性極低。本轉染試劑可應用於(yu) 瞬時轉染、穩定轉染、共轉染、高通量DNA轉染,基因表達和基因功能研究。
注意事項
1.轉染試劑使用前應先震蕩搖勻。
2.轉染效率與(yu) 細胞密度有很大關(guan) 係,不同實驗間應保持一個(ge) 基本的傳(chuan) 代步驟,確保轉染時細胞沒有長滿或處於(yu) 靜止期。
一般貼壁細胞轉染的*細胞密度是80-90%,懸浮細胞的*細胞密度為(wei) 3-5×10 5細胞/ml,用於(yu) 轉染的*細胞密度
3. 轉應染根據不同的時不要在培細養(yang) 胞基中加入抗生素,否類型或用途而異。則會(hui) 導致細胞死亡。
操作步驟
對於(yu) 大部分的細胞係, DNA與(yu) DNAfect的比例在1:2至1:3時轉染效率較高。為(wei) 了提高轉化效率、表達水平並且減少細胞毒性,實驗應在細胞密度較大時進行轉染。以下操作以24孔板每孔細胞的DNA轉染操作為(wei) 例。
1. 貼壁細胞:轉化前一天,在24孔板的每孔中加入500 μl無抗生素的生長培養(yang) 基,並於(yu) 每孔中接種0.5-2×105 個(ge) 細懸浮細胞:在胞,待細胞轉細染之前,在胞長至80-90%24孔板的滿時進每行孔中加入轉染。500μl無抗生素的生長培養(yang) 基,並於(yu) 每孔中接種3-5×10 5個(ge) 細胞。
2. 轉染當天,首先準備轉染複合物,對於(yu) 每孔細胞按照以下用量配製:
a. 取適量DNA,加入25 μl無血清培養(yang) 基,並輕輕的混合均勻。
b. 取適量DNAfect,加入25 μl無血清培養(yang) 基,輕輕混勻,並於(yu) 室溫孵育5分鍾。
c. 孵育5分鍾之後,將稀釋的DNA和稀釋的DNAfect混合(使DNA以及DNAfectin的終總體(ti) 積為(wei) 50 μl),輕輕混合均勻,並在室溫下孵育20分鍾(溶液可能會(hui) 出現絮狀,但不會(hui) 影響轉染效率)
注意:該混合物在室溫下可以穩定保存6小時。
3. 將步驟1中24孔板中培養(yang) 的細胞生長培養(yang) 基更換成450 μl無血清培養(yang) 基,然後將步驟2中50 μl轉染複合物加入到24細胞孔板內(nei) ,輕輕前後推動24孔板以混勻。
4. 將細胞置於(yu) 含5%CO2,37℃條件下培養(yang) 4-6小時後,更換成500 μl生長培養(yang) 基。
5. 18-48小時後進行轉染基因表達的檢測。
6. 對於(yu) 穩定的細胞係:在轉染24小時後,細胞按照1:10的比例傳(chuan) 代,第二天可加入篩選培養(yang) 基進行篩選。
注:(1) 該說明為(wei) 一個(ge) 24孔的用量,若同時轉幾個(ge) 孔,配製轉染複合物的量需加倍;若轉染其他類型孔板,DNA和DNAfect用量見附表,
該附表用量以293T細胞為(wei) 轉染細胞時的標準用量。
(2) 轉染4-6小時後也可以不更換生長培養(yang) 基,但由於(yu) DNAfect具有一定的細胞毒性,作用時間過長可能使某些細胞出現大量死亡現象,建議更換生長培養(yang) 基。
(3) 優(you) 化條件:想要得到更高的轉染效率,應優(you) 化轉染條件:培養(yang) 物、DNA濃度、細胞數和細胞與(yu) DNA複合物的孵育時間等條件都應進行優(you) 化。