siRNA轉染試劑說明書(shu)

貨號：YJ0871

保存：2-8℃

組分說明

   Catalog no.                YJ0871           YJ0871A

   Kit Size                  0.5 ml             1 ml

siRNA Transfection Reagent         0.5 ml           1 ml

產(chan) 品簡介

         siRNAFect 是一種的陽離子脂質體(ti) 轉染試劑。適用於(yu) 多種細胞的 siRNA  轉染，其原理為(wei) 帶正電的脂質體(ti) 通過靜電作用結合到 RNA  的磷酸骨架上形成轉染複合物，將轉染複合物加到細胞上可以與(yu) 帶負電的細胞膜表麵結合即可通過胞吞作用將 siRNA 導入細胞中。主要應用於(yu)  RNAi  研究，基因表達和基因功能研究等。

注意事項

 1.  轉染試劑使用前請先震蕩搖勻。

 2.  轉染效率與(yu) 細胞密度有很大關(guan) 係，不同實驗間應應保持一個(ge) 基本的傳(chuan) 代步驟，且應確保轉染時細胞沒有長滿或處於(yu) 靜止期。一般貼壁細胞轉染的*細胞密度是70-90%，懸浮細胞的*細胞密度為(wei) 2-4x106 細胞/ml，用於(yu) 轉染的*細 胞密度根據不同的細胞類型或用途而異。  

使用方法

    以下操作步驟以12孔板為(wei) 例，其他孔板按照表1中所列用量進行實驗。

  1.  在12孔板的每孔中加入1  ml正常生長培養(yang) 基（根據需要可加入適量的血清），接種1-3x10  細胞。在37℃條件下培養(yang) 細胞濃度至70-90%。根據細胞類型的不同，這一過程通常需要18-24小時不等。由於(yu) 轉染效率培養(yang) 條件及其敏感，所以應在不同的實驗間建立一個(ge) 標準的傳(chuan) 代流程。

  2.  將20 pmol iRNA溶於(yu) 終體(ti) 積為(wei) 50 μl的無血清，無抗生素的培養(yang) 基中，渦旋5秒或者用槍盡量吹打均勻。

  3.  將2.6  μl轉染試劑稀釋到終體(ti) 積為(wei) 50 μl的無血清，無抗生素的培養(yang) 基中，渦旋10秒。

      注意：溶解過程中可能會(hui) 出現白色混濁，但不影響轉染效率。

  4． 將稀釋好的轉染試劑加入到核酸溶液中（注意順序一定不能顛倒），渦旋1秒，室溫孵育15分鍾，使轉染試劑與(yu) 核酸形成穩定的複合物（此步驟盡量不要超過20分鍾，否則會(hui) 影響轉染效率）。

  5.  向穩定複合物中加入900  μl帶血清的培養(yang) 基，用槍輕輕吹打均勻。

  6.  吸去培養(yang) 板中原有的培養(yang) 基，加入步驟5中混合好的培養(yang) 基。在37℃條件下培養(yang) 細胞24-72小時。

  7.  根據細胞類型和啟動子活性不同，在轉染後24-72小時分析細胞抽提物，檢測報告基因活性。

  8.  對於(yu) 穩定表達的細胞係，在轉染72小時後，按1：10的比例在細胞中加入選擇培養(yang) 基對已轉染的報告基因進行篩選。

                                表1：  對不同大小的細胞培養(yang) 皿，試劑的用量

培養(yang) 板   每孔表麵積  鋪板培養(yang) 基體(ti) 積  siRNA和稀釋終體(ti) 積（μl）siRNA轉染試劑體(ti) 積

96孔         0.3        100  μl        3 pmol至10  μl     0.4  μl至10 μl

24孔          2         500  μl        10 pmol至20  μl       1.3  μl至20 μl

 12孔          4        1 ml           20 pmol至50  μl      2.6  μl至50 μl

35 mm        10         2 ml          50 pmol至100  μl       6.6  μl至100 μl

 6孔         10         2 ml          50 pmol至100  μl     6.6  μl至100 μl

  60 mm       20        5 ml     100 pmol至200  μl       13.3 μl至200 μl

 10 cm        60        15 ml      300 pmol至500  μl       40 μl至500 μl