大量DNA產(chan) 物純化試劑盒說明書(shu)

MaxiDNA Purification Kit

 大量 DNA產(chan) 物純化試劑盒

   貨號：  YJ0517

   保   存：  室溫

 組分說明

                                         Cat.No.                  YJ0517

                                         KitSize                     50

                                        BufferPB                   60ml

                                        BufferPS                   15ml

                               BufferPW（concentrate）                10ml

                                        BufferEB                   10ml

                                     SpinColumnDL                   50

                                CollectionTube（2ml）                 50

  產(chan) 品簡介

      本試劑盒采用新型矽基質膜技術，通過快速簡單的結合-洗滌-洗脫步驟即可從(cong) 大量的 PCR 產(chan) 物或酶反   應液（酶切，連接，探針標記等）中純化 50 bp-50 kb 的 DNA 片段，純化過程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等雜質，從(cong) 而獲得高純度，高濃度，完整性好的 DNA 片段，回收率高達 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可 直接用於(yu) 測序、連接和轉化、標記、體(ti) 外轉錄等分子生物學實驗。

注意事項

1.  本試劑盒可無選擇性的回收溶液中所有 DNA 片段，如需選擇性回收特定片段，同時去除其他不同大小片段，請選擇我公司的膠回收試劑盒（YJ0524, 加 YJ2302，YJ0518 或 YJ0526）。

2.  *次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。

3.  使用前請檢查BufferPB是否出現結晶或者沉澱，如有結晶或者沉澱現象，可在37℃水浴幾分鍾，即可恢複澄清。

4． 回收率與(yu) 初始DNA量和洗脫體(ti) 積有關(guan) 。

5． 所有離心步驟均為(wei) 使用台式離心機在室溫下離心。

自備：無水乙醇，離心管

               操作步驟

    1.   估計DNA反應液的體(ti) 積，加入5倍體(ti) 積的Buffer PB，充分混勻（如DNA反應體(ti) 係為(wei) 100μl，則加 入500μlBufferPB，無需去除石蠟油或礦物油）。

      注意：在加入BufferPB後檢測溶液的pH值，若pH值大於(yu) 7.5，可向其中加入10-30μl 的3M醋酸鈉（pH5.0），從(cong) 而將pH值調到5-7。

    2.    柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDL）中加入200μl Buffer PS，     12,000rpm（~13,400×g）離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

    3.   將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：吸附柱容積為(wei) 700μl，若樣品體(ti) 積大於(yu) 700μl可分批加入 。

    4.   向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

 注意：如果純化的DNA用於(yu) 鹽敏感實驗（例如平末端連接實驗或直接測序），建議加入BufferPW後靜置2-5分鍾再離心。

   5.  12,000rpm離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置於(yu) 室溫數分鍾，以*晾幹。

   注意：這一步的目的是將吸附柱中殘餘(yu) 的乙醇去除，乙醇的殘留會(hui) 影響後續的酶促反應（酶切、PCR等）。為(wei) 確保下遊實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置於(yu) 室溫放置數分鍾，以*晾幹吸附材料中殘餘(yu) 的乙醇。

  6.   將吸附柱放到一個(ge) 新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB（pH 8.5），室溫放置2分鍾。12,000rpm離心1分鍾，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。      注意：1）洗脫液的pH值對於(yu) 洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5之間（可以用NaOH將水的pH值調到此範圍）。

   2）為(wei) 了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重複步驟6。

   3）洗脫體(ti) 積不應小於(yu) 50μl，體(ti) 積過少會(hui) 影響回收效率。

    4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會(hui) 影響後續的酶促反應。

    5）回收大於(yu) 10kb的DNA片段時，BufferEB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。