大量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒說明書(shu)

MaxiGel Extraction Kit

貨號：  YJ0518

保   存：  室溫

組分說明

Cat.No.

YJ0518

50

KitSize

BufferPG

100ml

15ml

10ml

10ml

50

BufferPS

BufferPW（concentrate）

BufferEB

SpinColumnDL 

CollectionTube（2ml）

50

產(chan) 品簡介

     本試劑盒采用新型矽基質膜技術，通過快速，簡單的結合-洗滌-洗脫步驟可從(cong) 大量普通或低熔點瓊脂糖凝膠中回收純

化 50bp-50kb 的 DNA 片段，溶膠速度快，每個(ge) 吸附柱zui高可吸附 30 μg 的 DNA，純化過程中有效去除引物、核苷酸、

酶、礦物油、瓊脂糖等雜質，獲得高純度，完整性好的 DNA 片段，回收率高達 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用

於(yu) 測序、連接和轉化、酶切、標記、體(ti) 外轉錄等分子生物學實驗。

注意事項

1..*次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。

2.使用前請檢查BufferPG是否出現結晶或者沉澱，如有結晶或者沉澱現象，可在37℃水浴幾分鍾，即可恢複澄清。

3.電泳時使用新的電泳緩衝(chong) 液，以免影響電泳和回收效果。

4.切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷(shang) 。

5.回收率與(yu) 初始 DNA 量和洗脫體(ti) 積有關(guan) 。

6.所有離心步驟均為(wei) 使用常規台式離心機室溫下進行離心。

自備：無水乙醇，離心管

操作步驟

1. 將單一目的DNA條帶從(cong) 瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多餘(yu) 部分），放入幹淨的離心管（自備）中，稱取重量。 

注意：若膠塊的體(ti) 積過大，可將膠塊切成碎塊。

2. 向膠塊中加入3倍體(ti) 積Buffer PG；當瓊脂糖凝膠濃度>2%時，建議使用6倍體(ti) 積BufferPG（如凝膠重為(wei) 100mg，其體(ti) 積可視為(wei) 100μl，依此類推）。

3. 50℃孵育10分鍾，其間不斷溫和地上下顛倒離心管，以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊，可再補加一些溶膠液或繼續放置幾分鍾，直至膠塊*溶解。

注意：1）在膠充分溶解後檢測pH值，若pH值大於(yu) 7.5，可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl 的3M醋酸鈉（pH5.0）將pH值調到5-7。

      2）膠塊*溶解後將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為(wei) 吸附柱在較高溫度時結合 DNA 的能力較弱。

4.（可選步驟）當回收片段<500bp或>4kb時，應加入1倍膠體(ti) 積的異丙醇，上下顛倒混勻（如凝膠為(wei) 100mg，則加入100μl異丙醇）。

注意：當回收片段為(wei) 500bp-4kb時，加入異丙醇不會(hui) 影響回收率。

5.柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDL）中加入200  μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6.將步驟3或者步驟4所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：吸附柱容積為(wei) 700μl，若樣品體(ti) 積大於(yu) 700μl 可分批加入。

7.（可選步驟）向吸附柱中加入500μlBufferPG，12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：如果後續實驗用於(yu) 直接測序、體(ti) 外轉錄或顯微注射，推薦用此步驟以除去所有凝膠。8. 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

9. 注意：如果純化的DNA用於(yu) 鹽敏感的實驗（例如平末端連接或直接測序），建議加入BufferPW靜置2-5分鍾再離心。12,000rpm離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置於(yu) 室溫數分鍾，以*晾幹。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘餘(yu) 的乙醇去除，乙醇的殘留會(hui) 影響後續的酶促反應（酶切、PCR等）。為(wei) 確保下遊實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置於(yu) 室溫放置數分鍾，以*晾幹吸附材料中殘餘(yu) 的乙醇。

10.  將吸附柱放到一個(ge) 新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB（pH 8.5），室溫放置2分鍾。12,000rpm離心2分鍾，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。注意：1） 洗脫液的pH值對於(yu) 洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調到此範圍）。

2） 為(wei) 了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重複步驟10。

3） 洗脫體(ti) 積不應小於(yu) 50μl，體(ti) 積過少會(hui) 影響回收效率。

4） 如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會(hui) 影響後續的酶促反應。

5）回收大於(yu) 10kb的DNA片段時，BufferEB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。