通用型DNA純化回收試劑盒說明書(shu)

Universal DNA Purification Kit

目錄號：  YJ0519

保   存：  室溫

組分說明

                                         Cat.No.                   YJ0519

                                          KitSize                     50

                                         BufferPC                   50ml

                                         BufferPS                   15ml

                                BufferPW（concentrate）                10ml

                                         BufferEB                   10ml

                                     SpinColumnDM                   50

                                 CollectionTube（2ml）                 50

產(chan) 品簡介

   本試劑盒采用新型矽基質膜及特殊的緩衝(chong) 液係統，專(zhuan) 一的結合 DNA，既能從(cong) 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能直接純化 PCR  產(chan) 物與(yu) 酶反應物中的單鏈、雙鏈 DNA，可zui大限度地去除引物、酶、礦物油、瓊脂糖等雜質，獲得高純度的DNA，滿足多種實驗要求。本試劑盒可回收 50bp-50kb 的 DNA 片段，每個(ge) 吸附柱zui高可吸附 20 μg 的 DNA，且 DNA回收效率高達 90%。由本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用於(yu) 酶切、連接、PCR 擴增、DNA 測序等各種分子生物學實驗。

注意事項

1.  *次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。

2.  使用前請檢查BufferPC是否出現結晶或者沉澱，如有結晶或者沉澱現象，可在37℃水浴幾分鍾，即可恢複澄清。

3.  電泳時使用新的電泳緩衝(chong) 液，以免影響電泳和回收效果。

4.  切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷(shang) 。

5.  回收率與(yu) 初始 DNA 量和洗脫體(ti) 積有關(guan) 。

6.  所有離心步驟均在室溫下進行。

自備試劑：無水乙醇，離心管  

操作步驟

1． 樣品處理

   A 從(cong) 瓊脂糖凝膠中回收DNA片段

   a1. 將單一目的DNA條帶從(cong) 瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多餘(yu) 凝膠部分），放入幹淨的離心管（自備）中，稱取凝膠重量。 

        注意：若膠塊的體(ti) 積過大，可將膠塊切成碎塊。

   a2. 向膠塊中加入3倍凝膠體(ti) 積的Buffer PC；當瓊脂糖凝膠濃度>2%時，建議使用6倍凝膠體(ti) 積的  Buffer PC（如凝膠重為(wei) 100mg，其體(ti) 積可視為(wei) 100μl，依此類推）。

   a3.50℃孵育10分鍾，其間不斷溫和地上下顛倒離心管，以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊，可再補加一些溶膠液或繼續放置幾分鍾，直至膠塊*溶解。

       注意：1）在膠充分溶解後檢測pH值，若pH值大於(yu) 7.5，可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl 的3M醋酸鈉（pH5.0）將pH值調到5-7

             2）吸附柱的容積是 700μl，若樣品體(ti) 積大於(yu)  700μl 可分批加入。

             3）膠塊*溶解後將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為(wei) 吸附柱在較高溫度時結合 DNA 的能力較弱。

   a4.（可選步驟）當回收片段<500bp或>4kb時，應加入1倍膠體(ti) 積的異丙醇，上下顛倒混勻（如凝膠為(wei) 100mg，則加入100μl異丙醇）。

       注意：當回收片段為(wei) 500bp-4kb時，加入異丙醇不會(hui) 影響回收率。

   B 從(cong) PCR反應液或酶反應液中回收DNA

   b1．計算PCR反應液或酶切反應液的體(ti) 積，向其中加入5倍PCR反應液或酶反應液體(ti) 積的 Buffer PC，充分混勻（無需去除石蠟油或礦物油）。

    例如：100 μl的PCR樣本中加入500μlBufferPC（不包括石蠟油或礦物油）。

2． 柱平衡: 將吸附柱（SpinColumnDM）放入收集管（CollectionTube）中，向吸附柱中加入200 μl Buffer PS，12,000 rpm（~13,400×g）離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

3． 將從(cong) a3或b1中所得溶液加入到平衡好的吸附柱（已裝入收集管）中，室溫放置2分鍾，12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

    注意：吸附柱容積為(wei) 700μl，若樣品體(ti) 積大於(yu) 700μl 可分批加入。

4． 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液。

    注意：如果純化的DNA用於(yu) 鹽敏感的實驗（例如平末端連接或直接測序），建議加入BufferPW靜置2-5分鍾再離心。

5． 將吸附柱放回收集管中，12,000rpm離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置於(yu) 室溫數分鍾，以*晾幹。

     注意：這一步的目的是將吸附柱中殘餘(yu) 的乙醇去除，乙醇的殘留會(hui) 影響後續的酶促反應（酶切、PCR等）。為(wei) 確保下遊實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置於(yu) 室溫放置數分鍾，以*晾幹吸附材料中殘餘(yu) 的乙醇。

6.  將吸附柱放到一個(ge) 新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置加入30-50 μl Buffer EB（pH8.5）或水（pH7.0-8.5），室溫放置2分鍾。12,000rpm離心2分鍾，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

    注意：1）洗脫液的pH值對於(yu) 洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調到此範圍）。

          2）為(wei) 了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重複步驟6。

          3）洗脫體(ti) 積不應小於(yu) 30μl，體(ti) 積過少會(hui) 影響回收效率。

          4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會(hui) 影響後續的酶促反應。

          5）回收大於(yu) 10kb的DNA片段時，BufferEB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。