SuperRT逆轉錄酶（RNase H-）說明書(shu)

SuperRT Reverse Transcriptase

目錄號：YJ0740

保存條件：-20℃保存。

組分說明

              Cat. No.                YJ0740       YJ0740A

              Kit Size                   25           100

              SuperRT，200 U/μl          25 μl       100 μl

              5×RT Buffer              120 μl       500 μl

本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途  

產(chan) 品簡介

　　SuperRT逆轉錄酶是一種利用大腸杆菌工程菌進行重組與(yu) 表達的全新逆轉錄

酶。與(yu) Moloney鼠白血病病毒來源的M-MLV和鳥成髓細胞病毒來源的  AMV不同，該酶

不具有RNase H活性，能夠轉錄多種 RNA模板，可利用極低量的總RNA或mRNA

合成cDNA*鏈，起始樣本量可低至pg級，zui大限度將RNA逆轉錄成cDNA*鏈。

SuperRT逆轉錄酶與(yu) RNA親(qin) 合能力強，能通讀GC含量高，二級結構複雜的RNA模板，獲

得高產(chan) 量的cDNA。該酶耐熱性及穩定性強，操作簡單快速，可以合成   100bp-12kb的

cDNA。適用於(yu) *鏈cDNA的合成、RT-PCR、RT-qPCR以及全長cDNA文庫的構建等。

活性定義(yi)

　　以Poly（A）為(wei) 模板，oligo（dT）為(wei) 引物，在  37℃條件下，10分鍾內(nei) 催化摻入  1

nmol的dTTP所需酶量定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 活性單位(U)。

質量控製

　　200 U的本酶和1  μg的16 S，23 S  rRNA在37℃下反應1小時，RNA的電泳譜帶不

發生變化。

注意事項

1．在操作過程中應避免RNase汙染，防止RNA降解或實驗中的交叉汙染，建議在專(zhuan) 門

   的區域進行RNA操作，使用專(zhuan) 門的儀(yi) 器和耗材，操作人員帶口罩和一次性手套並經

   常更換手套。

2．實驗盡量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，應使用0.1％DEPC（焦碳酸二乙

   酯）水溶液在37℃處理12小時，並在120℃下高壓滅菌30分鍾後使用，或者將玻璃

   器皿在180℃下幹熱滅菌60分鍾後使用。實驗中用到的無菌水應使用 0.1%的DEPC

   處理後進行高壓滅菌。

3．本試劑盒中的所有試劑使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，並經短暫離心

   後使用。所涉及的酶類使用後應盡快放回-20℃，避免反複凍融。

4．若起始RNA的量小於(yu) 50  ng，建議加入RNA酶抑製劑（RNasin）。本試劑盒並未提

   供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號：YJ0596。

使用方法

注意：1 ng-5 μg總RNA可建立20 μl反應體(ti) 係，如果總RNA量大於(yu) 5 μg，請按比例擴大反應體(ti) 係。i逆轉錄操作步驟：

1．將RNA模板、引物、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT和RNase-Free Water溶解並

   置於(yu) 冰上備用。

2．根據以下表格配製反應體(ti) 係，總體(ti) 積為(wei) 20 μl。

試劑             20 μl反應體(ti) 係             終濃度

dNTP Mix，2.5 mM Each                  4  μl         500 μM Each

Oligo-dT Primer，100 μM

或  Random Primers，50 μM               1  μl

或  Specific Primer ,10 μM

RNA Template                          X  μl          50 pg-5 μg

5×RT Buffer                           4  μl              1×

SuperRT，200 U/μl                      1  μl

 RNase-Free Water                  up to 20  μl

    注意：若起始RNA的量小於(yu) 50 ng，則建議加入RNA酶抑製劑（RNasin）。本試劑盒並未提供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號：YJ0596。

3．渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。

4．42℃孵育30-50分鍾，85℃孵育5分鍾。反應結束後，短暫離心，置於(yu) 冰上冷卻。

5．逆轉錄產(chan) 物可直接用於(yu) PCR反應和熒光定量PCR反應，或置於(yu) -20℃長期保存。

  ii  若逆轉錄效率低，或RNA模板二級結構複雜、GC含量高時，建議采用以下步驟：

1．將RNA模板、引物、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT和RNase-Free Water溶解並

   置於(yu) 冰上備用。

2．根據以下表格配製反應體(ti) 係，總體(ti) 積為(wei) 15 μl。

 試劑                 20 μl反應體(ti) 係             終濃度

 dNTP Mix，2.5 mM Each                   4  μl         500 μM Each

 Oligo-dT Primer，100 μM

 或  Random Primers，50 μM                1  μl

 或  Specific Primer ,10 μM

 RNA Template                           X  μl          50 pg-5 μg

 RNase-Free Water                   up to 15  μl

     3．70℃孵育10分鍾，迅速冰浴2分鍾。

     4．短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。

     5．繼續向以上反應液中加入以下試劑：

試劑                  20 μl反應體(ti) 係                 終濃度

5×RT Buffer            4 μl                              1×

         注意：若起始RNA的量小於(yu) 50 ng，則建議加入RNA酶抑製劑（RNasin）。本試劑盒並未提供，

         如需要可單獨向本公司訂購，貨號：YJ0596。

     6．輕輕吹打混勻，若反轉錄引物為(wei) Oligo-dT  Primer或Specific  Primer時，42℃孵育2分 

        鍾；若反轉錄引物為(wei) Random Primers，則25℃孵育10分鍾。

     7．加入1 μl SuperRT（200 U/μl），輕輕吸打混勻。42℃孵育50分鍾。

     8．85℃孵育5分鍾。反應結束後，短暫離心，置於(yu) 冰上冷卻。

     9．逆轉錄產(chan) 物可直接用於(yu) PCR反應和熒光定量PCR反應，或置於(yu) -20℃長期保存。

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