微量DNA產(chan) 物純化試劑盒說明書(shu)

MicroDNA Purification Kit

  目錄號：  YJ0520

 保   存：  室溫

 組分說明                                        

           

                                        Cat.No.                  YJ0520

                                        KitSize                     50

                                       BufferPB                   30ml

                                       BufferPS                   15ml

                              BufferPW（concentrate）               10ml

                                       BufferEB                   10ml

                                   SpinColumnDS                    50

                               CollectionTube（2ml）                 50

 產(chan) 品簡介

     本試劑盒是專(zhuan) 門針對微量PCR產(chan) 物及一些酶反應液（酶切，連接，探針標記等）而設計的，利用矽基質膜技術，以非常小的終洗脫體(ti) 積（可少至10μl）,從(cong) 反應液中快速純化50bp-50kb的DNA片段，純化過程中可去除引物、寡核苷酸、酶等雜質，可獲得高純度，高濃度，完整性好的DNA，回收率高達90%。本試劑盒回收的DNA可直接用於(yu) 測序、連接和轉化、標記、體(ti) 外轉錄等分子生物學實驗。

 注意事項

 1.   本試劑盒適用於(yu) 無選擇性地回收溶液中所有的DNA片段，如需選擇性回收特定片段，同時去除其他不同大小片段，請選擇我公司的膠回收試劑盒（YJ0524，YJ2302，YJ0518或YJ0526）。

 2.   *次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在 BufferPW 中加入無水乙醇。

 3.   使用前請檢查 BufferPB 是否出現結晶或者沉澱，如有結晶或者沉澱現象，可在 37℃水浴幾分鍾，即可恢複澄清。

 4.   回收率與(yu) 初始DNA量和洗脫體(ti) 積有關(guan) 。

 5.   所有離心步驟均為(wei) 使用常規台式離心機室溫下進行離心。

 自備：無水乙醇，離心管  

操作步驟

1.    估計PCR反應液或酶切反應液的體(ti) 積，加入5倍體(ti) 積的Buffer PB，充分混勻（如PCR反應體(ti) 係為(wei) 50μl，則加入250μlBufferPB，無需去除石蠟油或礦物油）。

      注意：在加入BufferPB後檢測溶液的pH值，若pH值大於(yu) 7.5，可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸鈉（pH5.0），從(cong) 而將pH值調到5-7。

2.    柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDS）中加入200 μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

3.    將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

      注意：吸附柱容積為(wei) 700μl，若樣品體(ti) 積大於(yu) 700μl可分批加入。

4.    向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

      注意：如果純化的DNA是用於(yu) 鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議加入BufferPW後靜置2-5分鍾再離心。

5.    12,000rpm離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置於(yu) 室溫數分鍾，以*晾幹。

      注意：這一步的目的是將吸附柱中殘餘(yu) 的乙醇去除，乙醇的殘留會(hui) 影響後續的酶促反應（酶切、PCR等）。為(wei) 確保下遊實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置於(yu) 室溫放置數分鍾，以*晾幹吸附材料中殘餘(yu) 的乙醇。

6.   將吸附柱置於(yu) 一個(ge) 新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加10-30 μl Buffer EB，室溫放置2分鍾。12,000rpm離心1分鍾，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

      注意：1）洗脫液的pH值對於(yu) 洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5範圍內(nei) （可以用NaOH將水的pH值調到此範圍）。 

            2）為(wei) 了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回吸附柱中，重複步驟6。

            3）洗脫體(ti) 積不應小於(yu) 10μl，體(ti) 積過少影響回收效率。

            4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會(hui) 影響後續的酶促反應。

            5）回收大於(yu) 10kb的DNA片段時，BufferEB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。