微量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒說明書(shu)

MicroGel Extraction Kit

 目錄號：  YJ0524

 保   存：  室溫

 組分說明

                                           Cat.No.                   YJ0524

                                           KitSize                      50

                                          BufferPG                     50ml

                                          BufferPS                     15ml

                                 BufferPW（concentrate）                 10ml

                                          BufferEB                     10ml

                                      SpinColumnDS                     50

                                  CollectionTube（2ml）                  50

 產(chan) 品簡介

    本試劑盒於(yu) 從(cong) 普通或低熔點瓊脂糖凝膠中回收純化微量 DNA 片段，溶膠速度快，並利用矽基質膜技術，以非常小的終洗脫體(ti) 積（可少至 10 μl），從(cong) 瓊脂糖凝膠中，快速純化 50bp-50kb 的 DNA 片段，純化過程有效去除引物、寡核苷酸、酶等雜質，從(cong) 而可獲得高純度、高濃度，完整性好的 DNA，回收率高達 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用於(yu) 測序、連接和轉化、酶切、標記、體(ti) 外轉錄等分子生物學實驗。

 注意事項

 1． *次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在 BufferPW 中加入無水乙醇。

 2．使用前請檢查 BufferPG 是否出現結晶或者沉澱，如有結晶或者沉澱現象，可在 37℃水浴幾分鍾，即可恢複澄清。

 3．電泳時使用新的電泳緩衝(chong) 液，以免影響電泳和回收效果。

 4．切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對 DNA 造成損傷(shang) 。

 5．回收率與(yu) 初始 DNA 量和洗脫體(ti) 積有關(guan) 。

 6．所有離心步驟均為(wei) 使用台式離心機在室溫下離心。

 自備：無水乙醇，異丙醇，離心管  

操作步驟

1． 將單一的目的DNA條帶從(cong) 瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多餘(yu) 部分），放入幹淨的離心管（自備）中，稱取重量。

     注意：若膠塊的體(ti) 積過大，可將膠塊切成碎塊。

2． 向膠塊中加入3倍體(ti) 積Buffer PG；當瓊脂糖凝膠濃度>2%時，建議使用6倍體(ti) 積Buffer PG（如凝膠重為(wei) 100mg，其體(ti) 積可視為(wei) 100μl，依此類推）。

3． 50℃孵育10分鍾，其間不斷溫和地上下顛倒離心管，以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊，可再補加一些BufferPG或繼續放置幾分鍾，直至膠塊*溶解。

    注意：在膠充分溶解後檢測 pH 值，若 pH 值大於(yu)  7.5，可向含有 DNA 的膠溶液中加 10-30 μl 的 3 M 醋酸鈉（pH 5.0）將 pH 值調到 5-7。

4． 加入1倍膠體(ti) 積異丙醇，上下顛倒混勻（如凝膠為(wei) 100mg,則加入100μl異丙醇）。

5． 柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDS）中加入200 μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6． 將步驟4中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鍾，12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

    注意：吸附柱容積為(wei) 700 μl，若樣品體(ti) 積大於(yu) 700 μl可分批加入。

7． 吸附柱中加入500 μl Buffer PG，12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

8． 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

     注意：如果純化的DNA是用於(yu) 鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議加入Buffer PW後靜置2-5分鍾再離心。

9．12,000rpm離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置於(yu) 室溫數分鍾，以*晾幹。

    注意：這一步的目的是將吸附柱中殘餘(yu) 的乙醇去除，乙醇的殘留會(hui) 影響後續的酶促反應（酶切、PCR等）。為(wei) 確保下遊實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置於(yu) 室溫放置數分鍾，以*晾幹吸附材料中殘餘(yu) 的乙醇。

10．將吸附柱放到一個(ge) 新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加10 μl Buffer EB（pH8.5），室溫放置2分鍾。12,000rpm離心1分鍾，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

     注意：1）洗脫液的pH值對於(yu) 洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調到此範圍）。

           2）為(wei) 了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回吸附柱中，重複步驟10。

           3）洗脫體(ti) 積不應小於(yu) 10 μl，體(ti) 積過少會(hui) 影響回收效率。

          4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會(hui) 影響後續的酶促反應。

          5）回收大於(yu) 10 kb的DNA片段時，Buffer EB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。