HiFiScript快速去基因組cDNA*鏈合成試劑盒說明書(shu)

HiFiScript Quick gDNA Removal

cDNA Kit

HiFiScript快速去基因組cDNA*鏈合成試劑盒

目錄號：YJ2582

保存條件：-20℃。

規格說明

     Cat. No.                    YJ2582-25       YJ2582-100

     Kit Size                         25              100

     gDNA Eraser                    12.5 μl          50 μl

     10×gDNA Eraser Buffer           30 μl           120 μl

     HiFiScript，200 U/μl             25 μl           100 μl

     5×RT Buffer                    120 μl           500 μl

     Primer Mix                      30 μl           120 μl

     RNase-Free Water                1 ml            2×1 ml

        本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途  

產(chan) 品簡介

　　本產(chan) 品是用於(yu) 去除基因組DNA進行反轉錄的試劑盒。該試劑盒在42℃，2 min即可

除去基因組DNA。同時由於(yu) 反轉錄試劑中含有抑製gDNA  Eraser的組分，經過   gDNA

Eraser處理後的樣品可以直接進行逆轉錄反應合成cDNA。本試劑盒配有新型反轉

錄酶HiFiScript，新穎突變位點大幅提升酶的轉錄活性，  cDNA*鏈合成的效率和產(chan)

量更高，可利用pg級的總RNA或mRNA合成cDNA*鏈。如逆轉錄產(chan) 物cDNA用於(yu) 下

遊熒光定量檢測，可在42℃，15min完成逆轉錄反應。本試劑盒適用於(yu) *鏈 cDNA的

合成和後續的RT-PCR、RT-qPCR、以及全長cDNA文庫的構建等。

產(chan) 品特點

1．快速去除基因組：含有去除基因組DNA的gDNA  Eraser，隻需 2 min即可除去基因

   組DNA。

2．快速逆轉錄：15分鍾即可獲得熒光定量PCR模板cDNA*鏈合成。

3．靈敏度高：可利用pg級總RNA或mRNA模板合成cDNA*鏈。

4．的逆轉錄效率：新穎突變位點大幅提升酶活性能，獲得更高產(chan) 量的cDNA。

注意事項

1．在操作過程中應避免RNase汙染，防止RNA降解或實驗中的交叉汙染，建議操作人

   員帶口罩和一次性手套並經常更換手套，使用專(zhuan) 門的儀(yi) 器和耗材。

2．逆轉錄體(ti) 係配製在冰上進行操作，防止RNA發生降解。試劑盒的酶使用後盡快置於(yu)

   -20 oC保存，並盡量避免反複凍融。

3．反應體(ti) 係可倍比放大，10 μl反應體(ti) 係可zui大使用1μg總RNA。

4．Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配製而成，也可根據實驗需要選用

   Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。

5．若起始RNA的量小於(yu) 50 ng，建議加入RNA酶抑製劑（RNasin）。本試劑盒並未提

   供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號為(wei) YJ0596。

6．對於(yu) 二級結構複雜的RNA模板，建議在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5分

   鍾立刻置於(yu) 冰上，短暫離心後進行下一步操作。

操作步驟

    將模板RNA在冰上解凍；試劑盒組分在室溫解凍後立刻置於(yu) 冰上。使用前將每種溶

液渦旋振蕩混勻，並經短暫離心後使用。

一、去除基因組DNA反應

1．根據以下表格在冰上配製反應體(ti) 係，總體(ti) 積為(wei) 10 μl。為(wei) 了保證反應液配製的準確性，先按反應數+2的量配製預混體(ti) 係，然後再分裝到每個(ge) 反應管中，zui後加入RNA樣品。

                    試劑                           10 μl反應體(ti) 係

                    10×gDNA Eraser Buffer          1 μl

                    gDNA Eraser                   0.5 μl

                    RNA Template1）               10 pg-1 μg

                    RNase-Free Water             up to 10 μl

   注意：1）如果總RNA量大於(yu) 1 μg，請按比例擴大反應體(ti) 係。若起始RNA的量小於(yu) 50 ng，則建議   

   加入RNA酶抑製劑（RNasin），該產(chan) 品貨號為(wei) YJ0596。

2．渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。

3．42℃孵育2分鍾（室溫反應時，可以延長到30分鍾）。

4．反應結束後，短暫離心，置於(yu) 冰上冷卻。

二、逆轉錄反應

1．根據以下表格在冰上配製反應體(ti) 係，反應液配製請在冰上進行。為(wei) 了保證反應液配置的

   準確性，先按數+2的量配製成預混溶液，然後再分裝 10 μl到每個(ge) 反應管中，取配製的預混液10 μl加入至已完成去基因組的步驟1反應管中。

                    試劑                           20 μl反應體(ti) 係

                    步驟1反應液                         10 μl

                    HiFiScript，200 U/μl            1 μl

                    Primer Mix 1）                  1 μl

                    5×RT Buffer                    4 μl

                    RNase-Free Water               4 μl

   注意：1）  可根據實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建議20 μl 反應體(ti) Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。

1. 混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
2. 3．cDNA合成反應條件：

     1）若下遊進行熒光定量PCR檢測，42℃孵育15分鍾，85℃孵育5分鍾。

     2）若下遊進行普通PCR檢測，42℃孵育30-50分鍾，85℃孵育5分鍾。

注意：對於(yu) 二級結構複雜或GC含量高的模板，可以提高逆轉錄溫度至50℃，增強逆轉錄效率。

 4．反應結束後，短暫離心後置於(yu) 冰上，再進行後續PCR或熒光定量PCR，如果需要長時

      間保存，請置於(yu) -20℃。

  注意：進行Real-time PCR反應時，逆轉錄產(chan) 物的加量應不超過PCR反應總體(ti) 積的1/10。

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