小鼠髒器組織淋巴細胞分離液說明書(shu)
【產(chan) 品規格】
200ml/Kit
【產(chan) 品組成】
小鼠髒器組織淋巴細胞分離液：

【實驗前準備】
A．適用儀(yi) 器
zui大離心力可達 1200g的水平轉子離心機
B．耗材

【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
1.首先製備組織單細胞懸液，製備方法詳見“組織單細胞懸液製備技術"。
2.取一支15ml離心管，加入與(yu) 組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得少於(yu)
3ml）。
3.用吸管小心吸取組織單細胞懸液加於(yu) 分離液液麵上，400-500g，離心20-30min。（注：
根據組織單細胞懸液量確定離心條件，組織單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間
越長，具體(ti) 離心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果）。
4.離心後，此時離心管中由上至下分為(wei) 四層。*層為(wei) 稀釋液層。第二層為(wei) 環狀乳白色淋
巴細胞層。第三層為(wei) 透明分離液層。第四層為(wei) 紅細胞層。
5.用吸管小心吸取第二層環狀乳白色淋巴細胞層到另一15ml離心管中，向離心管中加入
10ml清洗液（產(chan) 品編號：2010X1118），混勻細胞。
6.250g，離心 10min。
7.棄上清。
8.用吸管以5ml清洗液（產(chan) 品編號：2010X1118）重懸所得細胞。
9. 250g，離心 10min。
10.重複 7、8、9，棄上清後以 0.5ml後續實驗所需相應液體(ti) 重懸細胞。
【注意事項】
1.全過程樣本、試劑及實驗環境均需在20±2℃的條件下進行。為(wei) 獲得的實驗結果，zui
好在取樣 2h內(nei) 進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過6h後
分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2.本實驗不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料製品，應使用無靜電、低靜電離
心管及未經堿處理過後的玻璃製品，因為(wei) 靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表麵
會(hui) 變成毛麵，影響細胞分離效果。
3.吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會(hui) 導致分離液交界處的粒細胞被吸出從(cong) 而使混雜的粒
細胞數量增加。
4.分離液用量大於(yu) 組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳。
5.如實驗後細胞得率或活性過低，請上海研謹生物以獲得和幫助。
【儲(chu) 存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封後置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考範圍）】
本實驗淋巴細胞提取率及純度大於(yu)  80%。

【相關(guan) 實驗技術方案】

1.組織單細胞懸液製備技術。
2.所獲得淋巴細胞的培養(yang) 技術。
3.所獲得淋巴細胞的核酸提取技術。
4.所獲得淋巴細胞的鑒定方法
A.流式細胞技術
B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR技術
注：上述技術方案詳情請登陸上海研謹生物科技公司搜索“細胞分離、
純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊(ce) "，並在說明書(shu) 項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決(jue) 方法】
1.由於(yu) 血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決(jue) 方案如下表所示：

2.本分離液分離細胞的原理為(wei) 密度梯度離心，其密度與(yu) 溫度、大氣壓等密切相關(guan) 。不同地
區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離
心時間，對離心轉速進行調整。
3.本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與(yu) 國產(chan) 同類產(chan) 品略有不同，可
能出現紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g為(wei) 基數，直至達到分離效果，
離心力zui小不得小於(yu)  400g，zui大不得大於(yu)  1200g。離心時間以 20-30min為(wei) 準。