小鼠脾髒淋巴細胞分離液試劑盒LTS1092PK
小鼠脾髒淋巴細胞分離液試劑盒說明書(shu)
【產(chan) 品規格】
200ml/Kit
【產(chan) 品組成】
為(wei) 方便廣大用戶使用，試劑內(nei) 容如下：
| 名稱 | 產(chan) 品編號 | 規格 |
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A | XXXX 動物脾髒組織淋巴細胞分離液 |
| 200ml |
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B | 樣本稀釋液（贈品） | 2010C1119 | 200ml |
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C | 清洗液（贈品） | 2010X1118 | 200ml |
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D | F 液（贈品） | F2013TBD | 200ml |
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E | 說明書(shu) |
| 1 份 |
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【實驗前準備】
A． 適用儀(yi) 器
zui大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
B． 耗材
| 產(chan) 品名稱 | 產(chan) 品貨號 | 產(chan) 地 |
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| 15ml 離心管散裝 | 339650 | 美國 NUNC |
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| 15ml 離心管架裝 | 339651 | 美國 NUNC |
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| 50ml 離心管散裝 | 339652 | 美國 NUNC |
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| 50ml 離心管架裝 | 339653 | 美國 NUNC |
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| 無菌膠頭滴管或塑料滴管 |
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【檢驗方法】 |
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全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
1. 首先製備脾髒組織單細胞懸液，製備方法詳見“脾髒組織單細胞懸液製備技術”。
2. 取一支 15ml 離心管，加入與(yu) 脾髒組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得 少於(yu) 3ml）。
3. 用吸管小心吸取脾髒組織單細胞懸液加於(yu) 分離液液麵上，400-500g，離心 20-30min。（注： 根據脾髒組織單細胞懸液量確定離心條件，脾髒組織單細胞懸液量越大，離心力越大， 離心時間越長，具體(ti) 離心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果）。
4. 離心後，此時離心管中由上至下分為(wei) 四層。*層為(wei) 稀釋液層。第二層為(wei) 環狀乳白色淋 巴細胞層。第三層為(wei) 透明分離液層。第四層為(wei) 紅細胞層。
5. 用吸管小心吸取第二層環狀乳白色淋巴細胞層到另一 15ml 離心管中，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chan) 品編號：2010X1118），混勻細胞。
6. 250g，離心 10min。
7. 棄上清。
8. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chan) 品編號：2010X1118）重懸所得細胞。
9. 250g，離心 10min。
10. 重複 7、8、9，棄上清後以 0.5ml 後續實驗所需相應液體(ti) 重懸細胞。
【注意事項】
1. 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為(wei) 獲得的實驗結果，zui 好在取樣 2h 內(nei) 進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 後 分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2. 本實驗不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料製品，應使用無靜電、低靜電離 心管及未經堿處理過後的玻璃製品，因為(wei) 靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表麵 會(hui) 變成毛麵，影響細胞分離效果。
3. 吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會(hui) 導致分離液交界處的粒細胞被吸出從(cong) 而使混雜的粒
細胞數量增加。
4. 分離液用量大於(yu) 脾髒組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳。
5. 如實驗後細胞得率或活性過低，請以尋求幫助，具體(ti) 詳 見下方生產(chan) 企業(ye) 信息。
【儲(chu) 存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封後置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考範圍）】
本實驗淋巴細胞提取率及純度均大於(yu) 80%。
下表為(wei) 成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。
| 紅細胞 |
| 白細胞 | 血小板 |
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含量（個(ge) /L） | （4.0-5.5）×1012 | （4.0-10.0）×109 | （1.0-3.0）×1011 |
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中性粒細胞 | 淋巴細胞 | 單核細胞 | ||||
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50%-70% 20%-40% 3%-8%
【相關(guan) 實驗技術方案】
1. 脾髒組織單細胞懸液製備技術。
2. 所獲得淋巴細胞的培養(yang) 技術。
3. 所獲得淋巴細胞的核酸提取技術。
4. 所獲得淋巴細胞的鑒定方法 A.流式細胞技術 B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR 技術
注：上述技術方案詳情請登陸本搜索“細胞分離、
純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊(ce) ”，並在說明書(shu) 項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決(jue) 方法】
1. 由於(yu) 血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決(jue) 方案如下表所示：
出現情況 | 出現原因 | 建議解決(jue) 方案 |
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離心後目的細胞存在於(yu) 血漿層或稀釋液層 | 轉速過小或離心時間過短 | 適當增減轉速 |
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離心後目的細胞存在於(yu) 分離液中 | 轉速過大或離心時間過長 | ||
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離心後白環層彌散 | 細胞密度過大 | 調整細胞密度 |
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離心後白環層太淺或看不見 | 細胞密度過小 | ||
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2. 本分離液分離細胞的原理為(wei) 密度梯度離心，其密度與(yu) 溫度、大氣壓等密切相關(guan) 。不同地 區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離 心時間，對離心轉速進行調整。
3. 本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與(yu) 國產(chan) 同類產(chan) 品略有不同，可 能出現紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g 為(wei) 基數，直至達到分離效果，
離心力zui小不得小於(yu) 400g，zui大不得大於(yu) 1200g。離心時間以 20-30min 為(wei) 準。
