狗外周血淋巴細胞分離液LTS1079

狗外周血淋巴細胞分離液說明書(shu)

【產(chan) 品規格】
200ml/Kit
【產(chan) 品組成】
為(wei) 方便廣大用戶使用，試劑內(nei) 容如下：

【實驗前準備】
A．適用儀(yi) 器
zui大離心力可達1200g的水平轉子離心機
B．耗材

【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在20±2℃的條件下進行。
首先取抗凝血按體(ti) 積比 1:1的比例與(yu) 樣本稀釋液（產(chan) 品編號：2010C1119）混勻，根據
稀釋後的樣本量大小，分以下兩(liang) 種情況：
情況 A：稀釋後的血液樣本量小於(yu)  5ml時，實驗方法如下：
1.取一支15ml離心管，先加入與(yu) 稀釋後樣本等量的分離液（注：分離液zui少不得少於(yu)   3ml）。
2.用吸管小心吸取稀釋後的血液樣本加於(yu) 分離液液麵上，400-500g，離心20-30min（注：
根據血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體(ti) 離
心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果）。
3.離心後，此時離心管中由上至下分為(wei) 四層。*層為(wei) 血漿層。第二層為(wei) 環狀乳白色淋巴
細胞層。第三層為(wei) 透明分離液層。第四層為(wei) 紅細胞層。
4.用吸管小心吸取第二層環狀乳白色淋巴細胞層到另一15ml離心管中，往所得離心管中
加入10ml清洗液（產(chan) 品編號：2010X1118），混勻細胞。
5. 250g，離心 10min。
6.棄上清。
7.用吸管以5ml清洗液（產(chan) 品編號：2010X1118）重懸所得細胞。
8. 250g，離心 10min。
9.重複6、7、8，棄上清後以 0.5ml後續實驗所需相應液體(ti) 重懸細胞。
情況 B：稀釋後的血液樣本量大於(yu) 等於(yu) 5ml時，實驗方法如下：
1.取一支適當的離心管，先加入與(yu) 稀釋後樣本等量的分離液。
2.將經稀釋後的血液樣本小心加於(yu) 分離液之液麵上，550-650g（zui大離心力可至1000g），
離心20-30min。（注：根據血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心
時間越長，具體(ti) 離心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果。加入血液樣本後，樣
本及分離液總體(ti) 積不得超過離心管總體(ti) 積的三分之二）。
3.剩餘(yu) 步驟同“情況A”中步驟 3至步驟  9。
【注意事項】
1.全過程樣本、試劑及實驗環境均需在20±2℃的條件下進行。為(wei) 獲得的實驗結果，zui
好在取血 2h內(nei) 進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過6h後
分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2.本實驗不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料製品，應使用無靜電、低靜電離
心管及未經堿處理過後的玻璃製品，因為(wei) 靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表麵
會(hui) 變成毛麵，影響細胞分離效果。
3.吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會(hui) 導致分離液交界處的粒細胞被吸出從(cong) 而使混雜的粒
細胞數量增加。
4.吸取過多的淋巴細胞層上層溶液會(hui) 導致血漿蛋白及血小板混雜。
5.如所實驗後細胞得率或活性過低，請上海研謹生物以尋求幫助。
【儲(chu) 存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封後置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考範圍）】
本實驗淋巴細胞提取率及純度均大於(yu) 80%。
下表為(wei) 成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。

【相關(guan) 實驗技術方案】
1.所獲得淋巴細胞的培養(yang) 技術。
2.所獲得淋巴細胞的核酸提取技術。
3.所獲得淋巴細胞的鑒定方法
A.流式細胞技術
B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR技術
注：上述技術方案詳情請登陸上海研謹生物公司搜索細胞分離、
純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊(ce) ”，並在說明書(shu) 項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決(jue) 方法】
1.由於(yu) 血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決(jue) 方案如下表所示：

2.本分離液分離細胞的原理為(wei) 密度梯度離心，其密度與(yu) 溫度、大氣壓等密切相關(guan) 。不同地
區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離
心時間，對離心轉速進行調整。
3.本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與(yu) 國產(chan) 同類產(chan) 品略有不同，可
能出現紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g為(wei) 基數，直至達到分離效果，
離心力zui小不得小於(yu)  400g，zui大不得大於(yu)  1200g。離心時間以 20-30min為(wei) 準。